Method Article

تصور تعبير البروتين القائم على CUBIC : إجراء لتصور تعبير البروتين في خزعات جلد الفأر ذات السماكة الكاملة

April 30th, 2023

In This Article

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

المصدر: Liang, H. et al. يصور بروتوكول CUBIC تعبير البروتين بدقة خلية واحدة في مستحضرات الجلد الكاملة. J. Vis. Exp (2016)

يصف هذا الفيديو تقنية التصور المستندة إلى CUBIC ، وهي تقنية تصوير تعتمد على تطهير الأنسجة للتقييم البصري للتعبير عن البروتين في خزعات الجلد الكاملة بدقة خلية واحدة في 3D. يسمح هذا البروتوكول البسيط تقنيا بتصور بروتينات الجلد دون تحضير أقسام الجلد.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

تمت مراجعة جميع الإجراءات المتعلقة بالحيوانات من قبل اللجنة المؤسسية المحلية لرعاية ومجلس المراجعة البيطرية JoVE.

< p class = "jove_title" >1. تحضير أنسجة جلد الفأر الشفافة

ملاحظة: كانت جميع الفئران المستخدمة في هذه الدراسة على خلفية وراثية C57BL / 6

  1. مجموعة من أنسجة جلد الفأر.
    1. قتل الفئران بشكل إنساني عن طريق خلع عنق الرحم.
    2. قم بإزالة الشعر بعناية من منطقة الجلد ذات الصلة باستخدام أداة تشذيب مع الحرص على عدم جرح الجلد.
    3. اغسل الجلد لتطهيره بنسبة 70٪ من الإيثانول في محلول ملحي مخزن بالفوسفات (PBS).
    4. ارفع جلد الرقبة الظهرية بالملقط وقم بعمل شق بال....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Results

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

p class = "jove_content" fo: keep-together.within-page = "1" >figure-results-1
الشكل 1: تحضير غرفة التصوير. ج: المواد الاستهلاكية المطلوبة لإعداد غرفة التصوير هي أزرق ، عجين اللعب أو ما شابه ذلك ، و 2 غطاء (24 × 50 مم). ب: قم بإعداد شريطين رفيعين من المسمار الأزرق (قطره حوالي 2 مم × 2 سم) ، وغطاءين. ج: ضع شرائط زرقاء على غطاء واحد ، مما يتيح مساحة كافية لخزعة الجلد. ضع خزعة الجلد في قطرة من محلول CUBIC2 بين الشريطين. د

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
لم يتم الإعلان عن أي تضارب في المصالح.

Materials

List of materials used in this article Name Company Catalog Number Comments بارافورمالدهيد سيجما ألدريتش ص 6418 الإيثانول 96٪ (غير ممس) الإمداد الكيميائي رقم 1170 4',6-دياميدينو-2-فينيليندول
(دابي) روش 10236276001 N ، N ، N '، N'-tetrakis (2-hydroxypropyl) إيثيلين ديامين ميرك ميليبور 821940 البولي إيثيلين جلايكول أحادي p-isooctylphenyl الأثير ميرك ميليبور 648462 تريتون X-100 ميرك ميليبور 648462 سكروز سيجما ألدريتش S0389 درجة حرارة القطع المثلى
(أكتوبر) مركب الأنسجة تيك 4583 الجسم المضاد للكيراتين 14 كوفانس PRB-155P الجسم المضاد المضاد ل Ki67 أبكام أب16667 الحمار المضاد للأرانب Alexa 594 تقنيات الحياة أ 21207 ثنائي ميثيل سلفوكسيد سيجما ألدريتش د2650 يوريا ميرك ميليبور 66612 [م] 2،2 ′ ، 2 '-نتريلوتريثانول ميرك ميليبور 137002 مجهر متحد البؤر شركة نيكون إنسترومنتس نيكون A1 - مجهر متحد البؤر كروزر6 ماكينة تشذيب الوجه براون براون كروزر6 فيس أزيد الصوديوم سيجما ألدريتش 438456

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

CUBIC ProtocolProtein ExpressionTissue ClearingConfocal MicroscopyWhole MountSkin BiopsiesAntibody StainingFluorescent Labeling3D ImagingSingle Cell Resolution

Related Articles