على النقيض المحسن سفينة حيوان صغير التصوير بواسطة microCT هو السريع ، وفعالة من حيث التكلفة وعالية الإنتاجية ، تقنية لالتسلسلي في الموقع فحص الورم من أجل التنمية ، لتحليل شبكة من الأوعية الدموية التي تغذي هذه الدول ، وبعد استجابة الأورام للتدخل العلاجي قبل السريرية (ق).
مقالة منهجية
التصوير النقيض المحسن باستخدام سفينة MicroCT
1Greehey Children's Cancer Research Institute, University of Texas Health Science Center at San Antonio , 2Small Animal Imaging Resources facility, University of Texas Health Science Center at San Antonio , 3Department of Cellular and Structural Biology, University of Texas Health Science Center at San Antonio , 4Department of Pediatrics, University of Texas Health Science Center at San Antonio
يفتح في علامة تبويب جديدة
في هذه المقالة
ملخص
Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
الملخص
Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
التصوير المقطعي المجهري (microCT) عروض عالية الدقة التصوير الحجمي للتشريح الحيوانات الحية الصغيرة. ومع ذلك ، فإن التباين بين الأنسجة الرخوة وسوائل الجسم المختلفة هي بطبيعتها الفقراء في الدقيقة CT الصور 1. في ظل هذه الظروف ، والتصور الأوعية الدموية تصبح مهمة مستحيلة تقريبا. للتغلب على هذه وتحسين التصور الأوعية الدموية يمكن أن تستخدم عوامل التباين الخارجية. هنا ، نقدم منهجية لتصور شبكة الأوعية الدموية في نموذج القوارض. باستخدام طويل المفعول مائي polydisperse ميودن الغروية وكيل النقيض من بركة الدم ، eXIA 160XL ، إلى أقصى حد ونحن المعلمات الحصول على الصور وتقنيات الصوت ، مما يجعل للعثور على الأوعية الدموية في الحيوانات الحية. وكانت إطارات متعددة (على الأقل 5-8 / لقطة في عرض) ، 360-720 وجهات النظر (ل360 | الجدول التناوب) اقتناء النتائج التي توصلنا إليها تشير إلى أنه لتحقيق تفوق على النقيض بين العظام والأنسجة اللينة من السفينة ، وإلزامية. لقد أثبتنا أيضا استخدام وظيفة نقل ثنائي الأبعاد (حيث تم تعيين لون فوكسل والتعتيم بما يتناسب مع قيمة وحجم الانحدار CT) ، في وضع الرؤية والتشريح وتسليط الضوء على بنية الفوائد ، وشبكة الأوعية الدموية. هذا العمل واعدا يرسي أساسا لتقييم نوعية وكمية من الألغام المضادة للالأوعية الدموية الدراسات قبل السريرية أو المعدلة وراثيا باستخدام طعم أجنبي الفئران الحاملة للورم.
البروتوكول
Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
1. حقن الحيوان
قبل الذيل الوريد حقن الوريد ، يجب تنظيف الجلد الذيل مع الدعك ايزوبروبيل لأغراض التعقيم. ثم ينبغي أن يتم حقن الفئران مع ز mL/20 0.2 من 20 ملغ اليود / مل ميودن عامل تباين bloodpool (eXIA 160XL ؛ Binito الطبية الحيوية ، وشركة أوتاوا ، ON ، كندا) عن طريق الوريد ذيل به القاصي ونصف مساحة ميتة منخفضة CC U -100 28G الأنسولين المحاقن ½ (المنتج # 329461 ، وشركة بيكتون ديكنسون بولاية نيوجيرسي ، الولايات المتحدة).
2. تحضير الحيوانات
بعد 10 دقائق من الحقن ، يجب أن تكون مستعدة للتصوير الحيوانات microCT. أولا ، يجب أن يكون تخدير الحيوان في مربع باستخدام 2 ٪ isoflurane في الأكسجين 100 ٪ بمعدل 2.5 لتر في الدقيقة. وينبغي تطبيق مرهم العين التشحيم لمنع جفاف قرنية العين من خلال التخدير. ينبغي الحفاظ على درجة حرارة الجسم عند 37 درجة مئوية من الحرارة منصات.
3. MicroCT التصوير
الفئران ثم ينبغي أن يتم فحصها على وحدة قادرة على تنفيذ microCT بفحص الحيوانات الحية. لتقليل الآثار الحركة والاستقرار ، ويمكن وضعها في غرفة الفئران متعددة الطرائق المتاحة تجاريا (Numira العلوم البيولوجية ، سولت لايك سيتي ، UT) مع النص على الهواء والعادم. لتجنب حلقة تبريدي على الحيوان أثناء التفحص microCT ، الوسادات جل (هوت تستجمع قواها العلاج الباردة ، CVS الصيدلة Woonsocket ، RI) ، تو أدفأ (مصنع الحرارة ، فيستا ، كاليفورنيا) أو الوسادات Thermipaq كلاي (الثرميونيات ، سبرينغفيلد ، IL) يمكن المستخدمة. وضع هذه منصات التدفئة تحت السرير رغوة للحفاظ على الماوس عند 37 درجة مئوية مع تجنب الاتصال المباشر مع الحيوانات. وينبغي رصد العلامات الحيوية للحيوان ، مثل درجة حرارة الجسم ، والتنفس ومعدل ضربات القلب باستخدام رصد الحيوانات الصغيرة ونظم المحاصرة مثل آلات SA (ستوني بروك ، نيويورك).
ويمكن استخدام بروتوكول التصوير التالية كدليل للمساعدة في تحديد معالم مناسبة لفحص أي وحدات microCT. وتفحص الحيوانات المستخدمة في هذه التجربة في القرار 93 ميكرومتر على الماسح الضوئي الحجمي GE CT استكشاف الحالة رقم (GE للرعاية الصحية ، لندن ، اونتاريو). هذا الماسح الضوئي الحجمي يستخدم للكشف عن اتفاقية مكافحة التصحر 3500 X 1750 لاعادة اعمار مخروط الشعاع Feldkamp. بقيت المعلمات منصة مستقلة عن الوقت الحالي ، والجهد والتعرض المستمر في أمبير 450 ، kVP 80 و 100 مللي ثانية ، على التوالي. المعلمات مستوى التعرض الوقت ، يمكن أن تكون متنوعة وعرض لقطة في عدد من وجهات النظر ويمكن ان يكون 100 مللي ، 5-8 ، و360-720 ، على التوالي مع الوقت تفحص ما مجموعه حوالي 20 دقيقة. أعيد بناؤها الصور مع برنامج الشركة المصنعة EVSBeam الملكية.
4. صورة التقديم
ويمكن استخدام البيانات لإعادة microCT isosurface المتقدمة ، ذات البعد الواحد ، أو ثنائي الأبعاد مما يجعل نقل الصور الدالة باستخدام برامج معالجة الصور Seg3D (Seg3D ، http://www.sci.utah.edu/cibc/software ).
5. ممثل النتائج
الرجاء انظر الشكل المرفق لماوس wildtype الممسوحة مع eXIA160XL مع الإعدادات المذكورة في المقطع الأساليب.
الشكل 1. ثنائي الأبعاد مما يجعل نقل الصور الدالة (2DTF) من ماوس wildtype التي تم إنشاؤها باستخدام برامج معالجة الصور Seg3D (Seg3D ، http://www.sci.utah.edu/cibc/software ). تم حقن الحيوان مع eXIA160XL و 10 دقيقة في وقت لاحق microCT الممسوحة في القرار 93 ميكرومتر متساوي القياس مع الإعدادات المذكورة في المقطع الأساليب.
الفيديو 1. ثنائي الأبعاد نقل وظيفة (2DTF) تقديم الفيلم على 360 درجة من التناوب ماوس wildtype التي تم إنشاؤها باستخدام برامج معالجة الصور Imagevis3D (Imagevis3D ، http://www.sci.utah.edu/cibc/software). تم حقن الحيوان مع eXIA160XL و 10 دقيقة في وقت لاحق microCT الممسوحة في القرار 93 ميكرومتر متساوي القياس مع الإعدادات المذكورة في المقطع الأساليب.
انقر هنا لمشاهدة الفيديو
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المناقشة
Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
الهدف من هذه التقنية قبل كل شيء من التباين التصوير باستخدام سفينة تعزيز microCT هو توفير أفضل طريقة لتوليد مجموعات البيانات ذات جودة عالية لتحليل شبكات الأوعية الدموية في الفئران الحية. microCT عن التصوير ، وأفضل إشارة إلى نسبة الضوضاء من الأنسجة اللينة هي التي حققها أوقات أطول مع مسح أعداد متزايدة من وجهات النظر وعدد من الإطارات في عرض 2.
هوية السفينة اعتمادا كبيرا على تحديد دقيق وتمايز الأنسجة اللينة...
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
الإفصاحات
Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
وأجريت جميع الاجراءات الحيوانية وفقا لمبادئ توجيهية لرعاية واستخدام الحيوانات المختبرية وتمت الموافقة من قبل المؤسسات ورعاية الحيوان اللجنة الاستخدام (IACUC) في جامعة تكساس مركز العلوم الصحية في سان انطونيو.
شكر وتقدير
Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
وأيد هذا العمل في جزء من الجائزة NCI 5R01CA133229 - 03.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المواد
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| eXIA 160XL | بينيتو بيوميديكال، إنك. | eXIA160XL-01 |
المراجع
Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
- Holdsworth, D. W., Thornton, M. M. Micro-CT in small animal and specimen imaging. Trends in Biotechnology. 20, 417-424 (2002).
- Kindlmann, G. L., Weinstein, D. M., Jones, G. M., Johnson, C. R., Capecchi, M. R., Keller, C. Practical Vessel Imaging by Computed Tomography in Live Transgenic Mouse Models for Human Tumors. Molecular Imaging. 4, 417-424 (2005).
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
إعادة الطباعة والأذونات
طلب إذن لإعادة استخدام النص أو الأشكال في مقالة JoVE هذه
طلب إذن