زرع مسبار مرن متوافق حيويا في نموذج فأر الورم الأرومي الدبقي

الملخص

المصدر: Lefevre، M.C.، et al.، الأجهزة الإلكترونية العضوية المرنة للعلاج الميداني الكهربائي النبضي للورم الأرومي الدبقي. J. Vis. Exp. (2022)

يوضح هذا الفيديو زرع مسبار مرن ومتوافق حيويا في نموذج فأر الورم الأرومي الدبقي لتقديم علاج المجال الكهربائي النبضي المستهدف لتطبيقات العلاج العصبي.

البروتوكول

تمت مراجعة جميع الإجراءات التي تنطوي على نماذج حيوانية من قبل اللجنة المؤسسية المحلية لرعاية ومجلس المراجعة البيطرية JoVE.

1. نموذج in vivo
   NOTE: الفئران الفلورية AMU-Neuroinflam البالغة متعددة الألوان (B6. تم استخدام Cg-Tg (Thy1-CFP) 23Jrs (Ly6a-EGFP) G5Dzk (Itgax-EYFP) 1Mnz / FD) ؛ تقدم هذه الفئران وضع علامات على مجموعة سكانية فرعية من الخلايا العصبية Thy1 ⁺ عن طريق التعبير المعدل وراثيا ل ECFP ، ووضع العلامات على الخلايا الالتهابية LyzM ⁺ المحيطية عن طريق التعبير المعدل وراثيا ل EGFP ووضع العلامات على نوع فرعي من الخلايا الدبقية الصغيرة التي تعبر عن EYFP تحت سيطرة Cd11c ⁺. باختصار ، يتم تخدير قليلا باستخدام 1.5٪ من الأيزوفلوران لمدة دقيقتين قبل أي علاج أو حقن. قبل الجراحة ، يتم تخدير بالكيتامين (120 مجم / كجم ؛ IP) والزيلازين (12 ملغم/كغ؛ IP). بعد ذلك ، يتم تطبيق جل الليدوكائين بنسبة 3٪ محليا لتخفيف أي ألم في الأذنين مرتبط بتثبيت الدعم التجسيمي. بعد ذلك ، يتم إعطاء محلول بوبيفاكائين 0.25٪ في موقع الجراحة لتخفيف أي ألم بسبب حج القحف. بمجرد تحضير الفأر للجراحة ، تم إجراء بضع قحف بقطر 4 مم. باستخدام إبرة 26 جم ، تم عمل ثقب في الأم الجافية في منتصف حج القحف ، وتم حقن كروي الورم بنظام الحقن. بالإضافة إلى ذلك ، كما هو موضح هنا ، تم وضع قطب كهربائي مرن على GCamp6 أو DsRed للتعبير عن كروي الورم قبل إغلاق حج القحف بنافذة زجاجية.
   1. ضع قطرة من محلول ملحي Dulbecco المخزن بالفوسفات (DPBS) بحيث يغطي حج القحف. ضع القطب المرن على قطرة DPBS ، وضع الجزء الخلفي من المسبار برفق مع وسادات التلامس على ظهر الماوس (الشكل 1 ب).
      ملاحظة: استخدم قفازات معقمة وتقنية "طرف فقط". قم بتغيير القفازات في حالة ملامسة سطح غير معقم. قدم الدعم الحراري أثناء هذا الإجراء.
   2. المس قطرة DPBS بقطعة صغيرة من الورق لامتصاص DPBS حتى يمكن للمسبار أن يوضع بشكل مسطح على الجافية ويتبع انحناء الدماغ. تأكد من بقاء طبقة صغيرة من DPBS أسفل الأقطاب الكهربائية دون الهروب من جانب القطب. هذا يضمن حاجزا ضد انتشار الغراء خلال الخطوات التالية.
      ملاحظة: تعقيم جميع المعدات قبل الاستخدام.
   3. ضع قطرة صغيرة من لاصق السيليكون على المسبار وقم بتغطيته بغطاء دائري بحجم 5 مم. ادفع زجاج الغطاء لأسفل حتى يتوزع السيليكون بالتساوي وتصبح المسافة بين زجاج الغطاء والمسبار ضئيلة. ادفع زجاج الغطاء لأسفل لمدة 30 ثانية أخرى حتى يتجمد السيليكون.
   4. لتأمين زجاج الغطاء ، قم بتطبيق superglue بسرعة على جوانبه وادفعه لأسفل حتى يعالج الغراء إلى صلب.
   5. باستخدام عود أسنان ، ضع الغراء الفائق على عنق المسبار ، مع الحرص على سحب الغراء الفائق تحت الرقبة لتوفير دعم ثابت له.
   6. قم بتغطية الجمجمة بأسمنت الأسنان لبناء غطاء مزمن. احرص بشكل خاص على تغطية حواف زجاج الغطاء فقط.
   7. ارفع الجزء الخلفي من المسبار وقم بوضع الأسمنت تحت رقبته. ضع المسبار على الأسمنت قبل أن يشفى. ادفع برفق عنق المسبار لأسفل باستخدام ملقط حاد بحيث يكون سطحه على نفس مستوى سطح زجاج الغطاء وليس في طريق هدف المجهر أثناء التجربة.
   8. قم بتغطية الجزء العلوي من عنق المسبار بما لا يزيد عن 1.5 مم من طبقة الأسمنت السني لتحقيق ثبات قوي على المسبار. قم ببناء بئر أسمنتي يقدم سلسلة من التلال 1.5 مم على مسافة 1-2 مم حول زجاج الغطاء لإنشاء حوض لسائل الغمر للتصوير ثنائي الفوتون (الشكل 1C).
   9. بعد أن يجف الأسمنت ، ضع مسكنات البوبرينورفين بعد الجراحة (0.05 مجم / كجم ، 0.1 مل لكل 10 جم من وزن الجسم تحت الجلد) وحافظ على في جو دافئ حتى يستيقظ. يتضمن ذلك القرب من مصباح الأشعة تحت الحمراء بالإضافة إلى لف بمنشفة ورقية.
      ملاحظة: ضع مقياس حرارة على مستوى الماوس لمراقبة درجة الحرارة.
   10. توصيف المعاوقة في نطاق 1-10 كيلو هرتز باستخدام بوتينسيوستات.
   11. دع يتعافى من الجراحة لمدة 10 أيام على الأقل. قم بإعطاء الأدوية المضادة للالتهابات مباشرة بعد الجراحة واستمر في مراقبة حالة لتوفير التسكين المناسب بعد الجراحة.

النتائج

فئة الشكل = 'image image-style-align-center image_resized' style = 'display: table ؛ margin-left: auto ؛ margin-right: auto ؛ width: 75٪ ؛ '>

الشكل 1: تطبيق in vivo. (أ) مخطط للتجارب في الجسم الحي. (ب) وضع المسبار قبل تطبيق زجاج الغطاء وراتنج الأكريليك. (ج) اكتمل زرع المسبار.

المواد

<فئة الشكل = 'الجدول'><فئة الجدول = 'ck-table-ressize'> قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة الاسم الشركة رقم فهرسي التعليقات راتنج الأكريليكFischer ScientificNC1455685 BuprenorphineAxience Lab صنع مولد النبض البنسلين / StreptomycinGibco15140-122 محلول ملحي عازلة للفوسفاتThermofisherD8537 Protolaser SLPKF غطاء دائري زجاج قطر 5 ممFischer Scientific50-949-439 لاصق سيليكون Kwik-SilWorld Precision Instruments مستودع مكتب الغراء الفائق U87-MGATCCHTB-14خلايا الورم الأرومي الدبقي البشري