توصيل أدوية العيون للتعديل العصبي غير الجراحي في نموذج الفأر

الملخص

المصدر: Zhan ، J. ، et al. استراتيجيات غير جراحية للتلاعب المزمن بالنشاط العصبي الذي يتحكم فيه DREADD. J. Vis. Exp. (2019)

يوضح هذا الفيديو طريقة توصيل أدوية العيون غير الغازية للتعديل العصبي المستهدف. يتم تسليم المخدرات عن طريق قطرات العين, امتصاص في الدورة الدموية, يعبر الحاجز الدموي في الدماغ, وينشط مستقبلات عصبية محددة.

البروتوكول

تمت مراجعة جميع الإجراءات التي تنطوي على نماذج حيوانية من قبل اللجنة المؤسسية المحلية لرعاية ومجلس المراجعة البيطرية JoVE.

1. التوصيل المتكرر لكوزابين N-oxide (CNO) باستخدام قطرات العين

1. تأقلم مع التعامل معها عن طريق تجعيد كل فأر لمدة 3 دقائق يوميا لمدة 3-4 أيام قبل إعطاء قطرات العين.
2. قم بإذابة أكسيد كلوزابين نيترونيتروجين (CNO ، 5 مجم) في 1 مل من محلول ملحي معقم 0.9٪ (محلول المخزون: 5 مجم CNO / مل). احتفظ بالمحلول في الثلاجة عند 4 درجات مئوية.
3. قم بوزن كل فأرة قبل بدء التجربة لتحديد مقدار CNO الذي سيتم تسليمه. استخدم قطرة 1-3 ميكرولتر (لكل عين) لتحقيق 1.0 مجم CNO / كجم من وزن الجسم.
   ملاحظة: على سبيل المثال ، يجب أن يتلقى الفأر 20 جراما قطرات عين ثنائية (2 ميكرولتر لكل منهما).
4. قم بتوصيل قطرات العين خلال المرحلة غير النشطة (الخفيفة) للفئران ، قبل ساعتين من إطفاء الأضواء (وقت zeitgeber (ZT) 10). في الحالات التي تحتاج فيها CNO إلى التسليم خلال المرحلة النشطة (المظلمة) للفئران ، تأكد من وجود ضوء أحمر خافت للتعامل السليم مع.
   ملاحظة: يجب اتخاذ الاحتياطات اللازمة لتجنب تعطيل الدورة البيولوجية (والضوء / الظلام) لحيوانات التجارب.
   1. باستخدام ماصة دقيقة P10، قم بتحميل الكمية المطلوبة (1-3 ميكرولتر) من محلول CNO لتحقيق 1.0 مجم CNO/kg.
      ملاحظة: استخدم طرف ماصة جديد ومعقم لكل قطرة عين. في هذه المجموعة من التجارب ، تم إجراء قطرات العين الثنائية من CNO. ومع ذلك ، إذا كان تركيز CNO أقل مطلوبا ، فيمكن أيضا استخدام قطرات العين من جانب واحد.
   2. شل حركة الماوس عبر القفص.
   3. طرد المحلول ببطء حتى تتشكل قطرة ثابتة على طرف الماصة.
   4. اجعل القطرة قريبة بحذر من قرنية عين الفأر حتى يتم توصيل المحلول. يجب ألا يتصل طرف الماصة بعين الماوس أبدا.
   5. حرر الماوس ، وضعه مرة أخرى في قفص منزله.
5. كرر هذا الإجراء كل يوم لمدة 5 أيام.
   ملاحظة: يمكن تعديل هذه المدة وفقا للمتطلبات التجريبية.

المواد

<فئة الشكل = 'الجدول'><فئة الجدول = 'ck-table-resize'>قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة الاسم الشركة رقم فهرسي التعليقات BSASigma life science#A2153-100Gمسحوق مجفف بالتجميد ≥96٪ (الرحلان الكهربائي لهلام الاغاروز) C57BL / 6J الفئرانمختبر جاكسون # 000664 ذكور الفئران ، الشعيرات الدموية البالغة من العمر 3 أشهردروموند الشركة العلمية # 3-000-203-G / Xالقطر الخارجي: 1.14 بوصة.كلوزابين-N-أكسيدسيجما#C08325 ملغفورانباكستر#NDC 10019-360-60إيزوفلوران ، USPMicroinjector IIIDrummond Scientific Company # 3-000-207Nanoject III - حاقن نانولتر قابل للبرمجةتركيب الوسائطInvitrogen#P36930إطالة كاشف الذهب المضاد للبهتان