حقن الببتيدات ذاتية التجميع والخلايا السليفة العصبية لإصلاح الحبل الشوكي في نموذج الفئران

Abstract

المصدر: Zweckberger, K., et al. الاستخدام التآزري للخلايا السلائف العصبية والببتيدات ذاتية التجميع في إصابة الحبل الشوكي العنقي التجريبية. J. Vis. Exp. (2015).

يوضح هذا البروتوكول نهج حقن مستهدف لإصلاح إصابات الحبل الشوكي في نموذج الفئران. يتضمن توصيل الببتيدات ذاتية التجميع (SAPs) إلى قلب الآفة لإنشاء سقالة داعمة ، تليها حقن خلية السلائف العصبية (NPC) حول الآفة لإعادة تشكيل الأنسجة.

Protocol

تمت مراجعة جميع الإجراءات التي تنطوي على نماذج حيوانية من قبل لجنة رعاية المؤسسية المحلية ومجلس المراجعة البيطرية JoVE.

1. تمدد الأوعية الدموية العنقية كليب كدمة / ضغط

1. نموذج قبل الجراحة ، قم بتعقيم الأدوات والحفاظ عليها معقمة أثناء العملية الجراحية بأكملها عن طريق وضعها في حمام كحول بنسبة 70٪.
2. تخدير فئران الويستار (250-270 جم) بمزيج من الأكسجين (O₂) وأكسيد النيتروز (N₂O) (1: 1) و 1.8-2.2٪ Isoflurane ودعم التنفس التلقائي عبر قناع التخدير بالغاز. لتحريض التخدير ، ابدأ ب 5٪ إيزوفلوران لمدة 1 دقيقة وقلل بعد ذلك. قبل بدء الجراحة ، تحكم في عمق التخدير عن طريق إعطاء حافز مؤلم (على سبيل المثال ، عند الكفوف). ضع المراهم الدهنية في العينين لتجنب الجفاف ومنع الالتهابات اللاحقة.
3. ضع الفئران على وسادة تدفئة (37 درجة مئوية) وثبت الرأس في إطار تجسيمي.
4. حلق المنطقة الجراحية حول العمود الفقري العنقي وتطهيرها بالبوفيدون واليود و 70٪ كحول.
5. قم بعمل شق خط الوسط فوق العمود الفقري من فقرة عنق الرحم (C2) للوصول إلى العملية البارزة للجسم الفقري الصدري 2 (T2).
6. اقطع الطبقة الخارجية لعضلات العمود الفقري مباشرة على خط الوسط (لتجنب النزيف) في اتجاه قحفي ذيلية وقم بتشريح طبقات العضلات العميقة بصراحة حتى تصل إلى المعالجة الشوكية والصفيحة. أدخل المباعدات.
7. توجيه المعالجة الشوكية البارزة للجسم الفقري T2 لمراقبة المستويات المستهدفة لاستئصال الصفيحة الفقرية. بعد تحديد الصفيحة المختارة والتحضير الجراحي المجهري لها ، قم بقطع ligamenti flavae لفك الصفيحة والمعالجة الشوكية. أخيرا ، قم بقطع الصفيحة باستخدام مقص عظمي جانبي للحبل الشوكي وقم بإزالتها برفق ، وتجنب أي ضغط على الحبل الشوكي نفسه.
   ملاحظة: المستويات الأكثر شيوعا هي C5 / 6 أو C6 / 7 أو C7 / T1. يزداد معدل الوفيات في الفترة المحيطة بالجراحة كلما زاد مستوى الإصابة المنقاري. النزيف من الجيوب الأنفية الوريدية المجاورة للفقرات شائع ويمكن معالجته عن طريق الضغط الدقيق باستخدام الإسفنجة.
8. قبل إدخال المشبك لإحداث صدمة في الحبل السري ، حدد جذور الأعصاب الناشئة لتجنيبها من القص (خاصة عند المستويات C5 / 6).
9. من أجل ضمان تحريض مشبك سلس ، قم بفك الجافية البطنية من الجانب الظهري للأجسام الفقرية بخطاف وقم بإعداد ممر للمقطع.
10. أخيرا ، أدخل المشبك المفتوح واتركه يغلق (إغلاق سريع) لتحقيق إصابة كدمة. تحدد قوة إغلاق المقطع ومدة إغلاق المقطع شدة الصدمة ومدى الضغط. يشيع استخدام قوى القصاصة التي تتراوح بين 15-35 جم ومدة القطع ، على سبيل المثال ، 1 دقيقة (الشكل 1).
11. بعد إزالة المقطع ، قم بتكييف العضلات في طبقتين وإغلاق الجرح.
12. توقف عن التخدير ودع يستيقظ تحت ملاحظتك المستمرة حتى يستعيد وعيه الكافي للاستلقاء القصي. أخيرا ، ضع الجرذ في قفص واحد واتبع إرشادات العلاج بعد الجراحة.
13. نظرا لأن تكافح مع شدة هذا النوع من الإصابات ، يجب أن تولي اهتماما خاصا لعلاجات ما بعد الجراحة:

Results

فئة الشكل = 'image image-style-align-center image_resized' style='display:table;margin-left:auto;margin-right:auto;width:75٪;'>

الشكل 1: نموذج تمدد الأوعية الدموية بالكدف/الضغط في المقطع. (أ) التصوير من خلال المجهر الجراحي بعد استئصال الصفيحة الفقرية ل C7 / T1 وكدمة / ضغط مقطع للحبل الشوكي للفئران. (ب) صورة المشبك مع الزنبرك الحلقي الذ...

Materials