توصيل الدواء المستهدف في نموذج الفأر عبر حقن Cisterna Magna

الملخص

المصدر: Zamboni، M.، et al.، تحريض تعديل الخلايا البريمية السحائية عن طريق الحقن داخل الخزان. J. Vis. Exp. (2020)

يوضح هذا الفيديو إجراء توصيل دواء محفز إلى صهريج فأر مخدر. يحفز الحقن بشكل انتقائي التعبير عن علامات الفلورسنت في خلايا سطح الدماغ التي يمكن الوصول إليها عن طريق السائل النخاعي ، والتي يؤكدها التصوير الفلوري.

البروتوكول

تمت مراجعة جميع الإجراءات التي تنطوي على نماذج حيوانية من قبل اللجنة المؤسسية المحلية لرعاية ومجلس المراجعة البيطرية JoVE.

1. وضع للإجراء

1. ثبت رأس على حامل الرأس. لتحسين إمكانية الوصول إلى صهريج ماجنا ، ضع جسم على بعد حوالي 30 درجة من سطح الطاولة والرأس بعنوان لأسفل ، لإنشاء زاوية 120 درجة مع بقية الجسم وتمديد الجزء الخلفي من العنق لتسهيل الوصول إلى صهريج الصهريج (الشكل 1 أ).
2. أضف مناشف ورقية أسفل لدعم جسمه طوال العملية.
3. تأمين توصيل التخدير من خلال قطعة الفم وتقليل تركيز الأيزوفلوران إلى 2.5٪ وتوصيل الهواء إلى 200 مل / دقيقة.
4. ضع مرهم العيون.

2. التعرض لصهريج ماجنا

1. حلق مؤخرة عنق وتعقيم المنطقة بنسبة 70٪ من الإيثانول والبيتادين.
2. باستخدام المقص الجراحي ، قم بإجراء شق خط الوسط (حوالي 7 مم في الطول) بدءا من مستوى العظم القذالي وتمديده للخلف.
3. افصل النسيج الضام السطحي وعضلات الرقبة برفق ، واسحب جانبا من خط الوسط باستخدام ملاقط رفيعة الرؤوس. سيؤدي ذلك إلى كشف الغشاء الجافوي الذي يتراكب مع صهريج ماجنا ، على شكل مثلث مقلوب.
4. استخدم رماح الامتصاص المعقمة أو مسحات القطن للسيطرة على أي نزيف ناتج.
5. ضع فاصلا جراحيا صغيرا للحفاظ على عضلات الرقبة المنقولة جانبا وتمكين تصور الصهريج طوال العملية.

3. الحقن داخل الخزف

1. للوصول إلى الصهريج القذالي ، حدد الطرف الذيلي للعظم القذالي وأدخل الإبرة التي كانت مثنية سابقا تحتها مباشرة.
   ملاحظة: سيكون هناك انخفاض مفاجئ في المقاومة مع ثقب الغشاء الجافوي. ومع ذلك ، فإن طرف الإبرة لن يخترق سوى القليل من السطح السحاوي ، وذلك بفضل شكله المعقوف.
بمجرد ثقب
2. الجافية ، اسمح لطرف الإبرة المنحني بالاختراق أسفل السطح الجافوي عن طريق سحب المحقنة برفق لأعلى وبالتوازي مع جسم ، من أجل "ربط" الإبرة بالجمجمة (انظر الشكل 1 ب). سيضمن ذلك ثباتا أفضل وسيمنع الإبرة من الاختراق بشكل أعمق ، وبالتالي تجنب خطر إتلاف المخيخ أو النخاع الأساسي.
3. حقن المركب ببطء لتجنب التداخل مع التدفق الطبيعي للسائل النخاعي.
   ملاحظة: اعتمادا على الغرض من التجربة ، قد يختلف معدل التسريب. إذا كان معدل التسريب البطيء والثابت مطلوبا (على سبيل المثال ، عند استخدام الإجراء لتتبع حركة السائل النخاعي) ، فقد يكون من المستحسن استخدام نظام التسريب الدقيق الآلي مع المحقنة.
4. بعد الحقن ، اترك الإبرة ترتاح في الموقع لمدة 1 دقيقة وقم بإزالتها بعناية. استخدم ملقطا رفيع الرؤوس للمساعدة في سحب الإبرة من وضعها المعقوف.
   ملاحظة: لا يؤدي استخدام إبرة رفيعة (على سبيل المثال ، 30 جم) إلى أضرار جسيمة للغشاء السحائي وما يترتب على ذلك من تدفق السائل النخاعي. إذا كانت هناك حاجة إلى أحجام إبرة أكبر ، فإننا نوصي بإيقاف تسرب السوائل عن طريق الضغط في موقع الحقن باستخدام طرف قطني معقم.

النتائج

فئة الشكل = 'الصورة image_resized image-style-align-center' style='display:table;margin-left:auto;margin-right:auto;width:75٪;'>

الشكل 1: وضع العلامات المحددة للخلايا السحائية البريمائية عن طريق الحقن داخل الخزف للإندوكسيفين. يوضح اللوحان A و B الإجراء الذي تم تطويره للإعطاء داخل المجمع. من أجل الوصول إلى صهريج ماجنا ، يجب شد الجزء ال...

المواد

<فئة الشكل = 'الجدول'><فئة الجدول = 'ck-table-resize'> قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة الاسم الشركة رقم فهرسي التعليقات Anesthesia unitUniventor 4108323102كاملة من المرذاذ والغرفة والأنابيب التي تتصل بالغرفة وحامل رأس الفأرالتخدير (Isoflurane) باكستر ميديكال AB890 BetadineSigma-AldrichPVP1 EndoxifenSigma-AldrichE8284 Ethanol 70٪ Histolab1370 حقنة هاميلتون (إبرة مشطوفة 30G) حامل رأس الماوس هاميلتون80300 Narishige InternationalSGM-4مع قطعة فم لعلاج النزوح الاستنشاقي. بدلا من ذلك ، استخدم إطارا مجسيمامقصأدوات العلوم الدقيقة15009-08 ماكينة حلاقةAesculapGT420 رماح امتصاص معقمةأدوات العلوم الدقيقة18105-01مسحات القطن المعقمة هي أيضا خيار جيدفاصل جراحيأداة الدقة العالمية501897 ملاقطدومون11251-35