إعادة الاتصال المباشر للأعصاب العنقية لاستعادة حركة الأطراف الأمامية في الفأر

الملخص

المصدر: Gao, Z., et al. نموذج فأر للمفاغرة المباشرة عبر طريق ما قبل العمود الفقري لجراحة نقل العصب. J. Vis. Exp. (2021).

يوضح هذا الفيديو استعادة حركة الطرف الأمامي في الفأر عن طريق إعادة الاتصال المباشر بعصب عنق الرحم. يبدأ بفأر مصاب بالشلل الأمامي الأيمن بسبب عصب C7 الأيمن المنقول في جذر العصب. يتم قطع العصب C7 الأيسر ، وتوجيهه إلى اليمين عبر طريق العمود الفقري ، وخياطته بالعصب C7 الأيمن. ثم يتم تنظيف موقع الجراحة وإغلاقه.

البروتوكول

تمت مراجعة جميع الإجراءات التي تنطوي على نماذج حيوانية من قبل اللجنة المؤسسية المحلية لرعاية ومجلس المراجعة البيطرية JoVE.

تم استخدام الفئران البالغة C57BL / 6N البالغة من العمر ثمانية أسابيع.

1. إعداد ما قبل الجراحة

1. تأكد من مخزون مناسب من الأدوات الجراحية المعقمة والمعقمة والمعدات والأدوية المسكنة وأدوية التخدير.
2. تأكد من مساحة عمل كافية على طاولة العمليات.
3. قم بإعداد طاولة العمليات باستخدام لوح رغوة جراحي مخصص مغطى بالحفاضات كسرير للماوس. قم بتثبيت وسادة الاحترار على لوح الرغوة بشريط طبي مغطى بشاش معقم.
4. قم بإنشاء ضادات عن طريق ثني إبرة الوخز بالإبر باستخدام ملقط الأوعية الدموية ، وطيها إلى نصفين ، ثم ثني طرف إبرة الوخز بالإبر المطوية في خطاف. قم بتثبيت شريط مطاطي في نهاية إبرة الوخز بالإبر ، واستخدم دبوس الإبهام لتثبيت نهاية الشريط المطاطي على لوح الرغوة.
5. معايرة المجهر المجسم ؛ اختر مجهريا مجسمه بمسافة تركيز كافية. قم بتغطية أزرار التكبير/التركيز بورق الألمنيوم المعقم للسماح للجراح بضبطها أثناء العملية. تم وضع رقائق الألومنيوم المعقمة على أزرار التكبير / التركيز ، مما يسمح للجراح باستخدامها مع قفازات معقمة.

2. تخدير الفأر وتحضيره

1. : قم بوزن الفأر وتخديره حسب وزن جسمه (الأيزوفلوران 3٪). تأكد من أن الماوس لا يستجيب عند ضغط المساحات بين الأصابع لمخلبه لتأكيد عمق التخدير. يجب الحفاظ على عمق التخدير الكافي طوال العملية (1٪ إيزوفلوران).
2. ضع مرهم العين ثنائيا على العينين لمنع تهيج القرنية أو جفافها أثناء الجراحة.
3. جهز موقع الجراحة عن طريق حلق الفراء على الرقبة والصدر باستخدام مقص أوتوماتيكي. إزالة وتنظيف الشعر المتساقط.
4. ضع الماوس في وضع ضعيف على وسادة التدفئة المغطاة بشاش معقم. حافظ على درجة حرارة الماوس عند 37 درجة مئوية أثناء العملية بأكملها. ثبت الفأر بشريط طبي للتسبب في اختطاف الأطراف الأمامية أفقيا ومنع الأطراف الخلفية والذيل من الحركة. تم وضع ستارة جراحية معقمة يمكن التخلص منها مع فتحة مناسبة على الفئران.

3. الإجراء الجراحي

1. حقن الترامادول كمسكن وقائي (20 مجم / كجم ، داخل الصفاق أو IP). ضع علامة على الشق العرضي على الحافة العلوية للترقوة. استخدم ثلاث دورات من الدعك المتناوبة لمحلول تطهير اليودوفور والإيثانول لتطهير موقع الجراحة. تأكد من عمق التخدير بقرصة إصبع القدم قبل الجراحة.
2. من خلال العمل تحت المجهر ، قم بعمل شق عرضي 4 مم على طول العلامة باستخدام مشرط معقم. قم بتكبير الشق أثناء العملية حسب الضرورة.
3. تشريح بصراحة من خلال اللفافة تحت الجلد وتحديد الحدود السفلية للغدة تحت الفك السفلي. اسحب الغدة تحت الفك السفلي لأعلى لفضح الحفرة فوق الترقوة والقص.
   ملاحظة: قد تكون هناك أوعية دموية صغيرة العيار في هذه المنطقة. يمكن استخدام الكي الكهربائي لوقف النزيف.
4. قم بعمل شق جزئي لبضع القص المتوسط (~ 4 مم) عن طريق شق القص من الرأس إلى الذيل على طول خط الوسط. حماية غشاء الجنب والقلب والأوعية الدموية أثناء بضع القص.
5. تحديد العضلة القصية التهيوية. اسحب القص برفق باستخدام ضامتين صغيرتين مخصصتين مصنوعتين من إبر الوخز بالإبر وتحديد العضلة القصية الوهمية فوق القصبة الهوائية والمريء. اسحب هذه العضلة لفضح الشريان السباتي والوريد الوداجي الداخلي والعصب الحجابي والعصب المبهم والقصبة الهوائية والمريء.
   ملاحظة: اسحب القص برفق لتجنب استرواح الصدر المفتوح. على عكس البشر ، فإن مريء الفأر ليس خلف القصبة الهوائية ولكنه مجاور للقصبة الهوائية على الجانب الأيسر.
6. تحديد الضفيرة العضدية اليسرى. عند الحافة الجانبية للوريد الوداجي الداخلي الأيسر ، اسحب اللفافة والأنسجة الدهنية للخارج لفضح الضفيرة العضدية. ابحث عن الجذع العلوي ، المكون من أعصاب عنق الرحم أو C5 و C6 ، والتي لها ثلاثة فروع. حدد الجذع الأوسط المكون من العصب C7 والجذع السفلي المكون من الأعصاب C8 والأعصاب الصدرية أو T1 ، على طول الجذع العلوي حتى ذيل الفأر.
   ملاحظة: توجد أوعية دموية طولية على سطح الضفيرة العضدية. استخدم الكي الكهربائي لمنع النزيف. عند فصل الضفيرة العضدية اليسرى ، قم بحماية القناة الكيلوس لتجنب الناسور الشيلي.
7. حصاد العصب C7 الأيسر. تشريح الانقسام الأمامي والانقسام الخلفي للجذع الأوسط (العصب C7) بعيدا إلى مستوى الانقسام إلى الحبل السفلي تحت الترقوة ومنع العصب C7 ب 0.1 مل من 2٪ ليدوكائين عن طريق التسريب الموضعي في جذع العصب. قم باستئصال العصب C7 باستخدام مقص زنبركي Vannas عند نقاط اندماجه مع الحبل الجانبي والحبل الخلفي. قم بقص العصب C7 بحيث يكون طول كل قسم متشابها.
   NOTE: تعمل الأقسام الأمامية والخلفية للعصب C7 والانقسامات الأمامية والخلفية للجذوع العلوية والسفلية لمسافة طويلة قبل الالتقاء ، لذلك يجب تحرير العصب C7 بشكل كاف قبل الاستئصال. في الواقع ، لا ينقسم العصب C7 دائما إلى قسمين. في بعض الأحيان ، يتم تقسيمها إلى ثلاثة أقسام أو حتى إلى أربعة في حالات نادرة.
8. قم بإزالة الصفيحة البطنية C6 اليسرى. قم بحماية العصب الحجابي بعناية وقطع العضلة الأمامية على مستوى الجزء C6 لفضح جذر العصب C7. قطع فروع صغيرة من العصب C7 ، مما يؤدي إلى تعصيب العضلة المجاورة الشوكية بالملقط الدقيق. اسحب العصب C7 برفق واستئصال الصفيحة البطنية C6 بعناية.
   ملاحظة: هناك بروز عظمي بين الجانب الإنسي للشريان السباتي الأيسر والجانب الجانبي للمريء. هذا البروز العظمي هو الصفيحة البطنية للفقرة العنقية السادسة. العضلة الطولية للحافة الجانبية للصفيحة البطنية C6 هي العضلة الأمامية ، ويمتد العصب الحجابي على سطح العضلة الأمامية.
9. حصاد العصب C7 الأيمن. اقطع العضلة الأمامية على الجانب الأيمن ، على غرار الجانب الأيسر ، وقم بتمرير جذر العصب الأيمن C7 بالقرب من الثقبة الفقرية. قم بتشريح العصب C7 الأيمن من مستوى انقسامه.
   NOTE: قم بقطع العصب C7 الأيمن بعناية لمنع تلف الأوعية الدموية تحت العصب.
10. انقل العصب C7 الأيسر.
    1. قم بإزالة الكولي العضلي الطويل بجانب الأجسام الفقرية جزئيا على كلا الجانبين. افصل وقم بتوسيع المسافة بين القصبة الهوائية والمريء والجسم الفقري.
    2. أرسل خياطة نصف طية 5-0 من النايلون من الجانب الأيمن من الجسم الفقري إلى الجانب الأيسر من خلال مسار ما قبل العمود الفقري.
    3. اربط العصب C7 الأيسر بأنبوب التسريب وقم بتوجيه العصب إلى الجانب الأيمن عبر الطريق قبل الشوكي.
    4. اسحب القصبة الهوائية والمريء برفق وقم بربط الانقسامات الأمامية والخلفية للعصب C7 الأيسر إلى جذر العصب C7 الأيمن دون توتر باستخدام خيوط نايلون 12-0. خياطة epineurium حول الأعصاب مع 4-5 غرز لتجهيز الأعصاب بقوة.
       ملاحظة: من الأهمية بمكان اختيار أنبوب التسريب البلاستيكي بسماكة مناسبة. يمكن أن يؤدي الأنبوب الرفيع جدا إلى تلف العصب ، ويمكن أن يؤدي الأنبوب السميك جدا إلى تلف القصبة الهوائية والمريء. بالإضافة إلى ذلك ، فإن المسافة بين القصبة الهوائية والمريء والجسم الفقري عبارة عن مساحة على شكل حرف "V" ، ويمكن أن يؤدي قطع جزء من القولون الطويل العضلي إلى تقصير مسار النقل.

4. إغلاق الجرح

ري

1. الجرح بمحلول ملحي عادي معقم وجففه بشاش معقم.
2. خياطة القص وأغلق الجلد باستخدام 5-0 خيوط أحادية.

5. رعاية ما بعد الجراحة

1. انتظر حتى يستيقظ الفأر من التخدير. انقل الماوس إلى قفص نظيف بدون مواد الفراش ، ولكن دافئ ببطانية دافئة. راقب الماوس حتى يصبح متنقلا. استخدم الترامادول (20 مجم / كجم ، IP) كمسكن بعد الجراحة.
2. ضع الفئران في قفص التعافي وراقبها حتى الشفاء. استعادة الماء والنظام الغذائي للفئران بعد العملية. راقب الفئران بعد الجراحة بحثا عن علامات الضعف أو العدوى كل يوم ، بما في ذلك سوء التغذية والوضعية المنحنية والفراء المكشكش. بعد أسبوعين من الجراحة ، يجب أن تتم إزالة الخيط.
   ملاحظة: ضع مرهم الإريثروميسين على سطح الجرح كل يوم لمدة ثلاثة أيام متتالية.
3. إذا لوحظت أي مضاعفات ، مثل وذمة الجرح ، فيجب حلها على الفور.

المواد