تمت مراجعة جميع الإجراءات التي تنطوي على نماذج حيوانية من قبل اللجنة المؤسسية المحلية لرعاية ومجلس المراجعة البيطرية JoVE.
1. إدارة MN-anti-miR10b
ملاحظة: في هذه الدراسة ، تم إجراء الحقن مرة واحدة في الأسبوع لمدة 6 أسابيع بدءا من 7 أيام بعد الزرع ، ولكن يمكن استخدام نفس البروتوكول لترددات الحقن المختلفة.
- قم بوزن الماوس واحسب حجم MN (الجسيمات النانوية المغناطيسية) - anti-miR10b لإدارته للماوس. تعطى جرعات MN-anti-miR10b بمعدل 20 مجم حديد (حديد) / كجم في نماذج GBM (الورم الأرومي الدبقي متعدد الأشكال). على سبيل المثال ، يتلقى الفأر 20 جم جرعة 80 ميكرولتر من 5 مجم Fe / مل MN-anti-miR10b. تتلقى الفئران الضابطة حجما متساويا من PBS (محلول ملحي مخزن بالفوسفات) بما يتفق مع مخطط الجرعات هذا.
- قم بإعداد حقنة 28G بجرعة MN-anti-miR10b وتأكد من عدم وجود فقاعات في محلول الحقن.
- قم بتخدير الفأر تحت 2٪ -4٪ أيزوفلوران للحث و 1.5٪ -2٪ للصيانة بمعدل تدفق 1.5 لتر / دقيقة في صندوق الحث. حرك الفأر إلى مخروط الأنف واستمر في إعطاء التخدير. تحقق من عمق التخدير وقم بتطبيق مرهم بيطري.
- عقم الذيل بمنديل 70٪ من الأيزوبروبانول واترك الكحول الزائد يجف.
- قم بتدوير الذيل لوضع الأوردة الذيلية الجانبية في الجزء العلوي من الذيل. ثم ، بهدف الوريد ، أدخل الإبرة في الذيل وقم بإنشاء فراغ عن طريق سحب المكبس للخلف.
- أدخل الإبرة حتى يدخل الدم إلى المحقنة ، مما يشير إلى الدخول الناجح إلى الوريد.
- حقن MN-anti-miR10b ببطء وسحب الإبرة بعد الولادة الكاملة. اضغط على موقع الحقن بالشاش حتى يتوقف النزيف.
- قم بإزالة الماوس من مخروط الأنف. راقب الماوس حتى يتعافى تماما ومتنقل.
ملاحظة: قد يسبب إعطاء البلعة للجسيمات النانوية ضيق في التنفس. راقب الماوس بعناية وقم بتطبيق ضغطات خفيفة على الصدر على الفور إذا كانت هناك علامات على ضائقة التنفس.