طورنا hindlimb alternant تفريغ النموذج في الفئران. الميزة الرئيسية لدينا وسيلة hindlimb الذيل الدائري التفريغ خلال تقنية التقليدية الذيل الجر موري هولتون ، هو إجراء بسيط مباشر أن يقلل الإجهاد على الحيوان.
مقالة منهجية
طورنا hindlimb alternant تفريغ النموذج في الفئران. الميزة الرئيسية لدينا وسيلة hindlimb الذيل الدائري التفريغ خلال تقنية التقليدية الذيل الجر موري هولتون ، هو إجراء بسيط مباشر أن يقلل الإجهاد على الحيوان.
وموري ، هولتون hindlimb التفريغ (HU) الأسلوب هو مقبول على نطاق واسع الوطنية للملاحة الجوية والفضاء الأميركية (ناسا) أرضية نموذجية لدراسة الترك ، ضمور في القوارض و 4-6. دراستنا تقييم أسلوب alternant إلى معيار الذهب موري - هولتون أسلوب جر الذيل هو جين تاو فى الفئران. وكانت أربعة وخمسين إناث الفئران (4-8 مو). HU لمدة 14 يوما (ن = 34) أو 28 يوما (ن = 20). وجرى تقييم التعافي من الخليل بعد 3 أيام من العمل بشكل طبيعي بعد التمشي القفص هو (22 = ن). خدم الذين تتراوح أعمارهم بين الفئران المتطابقة (ن = 76) وتحمل الوزن الضوابط.
قبل HU تم تشكيل عصابة الذيل 2-0 العقيمة مع أسلاك الفولاذ الجراحية التي تم تمريرها من خلال ال 5 و ال 6 أو ال 7 بين مساحة القرص الفقري وظهر على شكل حلقة التي تم تعليقها من الفئران. وقد تم اختيار الموقع الفقري لعصابة الذيل لتحقيق التوازن بين وزن الجسم بشكل مناسب الحيوان من دون التدخل في التغوط.
نحن مصممون على نجاح هذه التقنية HU رواية تقييم وزن الجسم قبل وبعد HU ، ودرجة ضمور النعلية ، والغدد الكظرية HU الشامل التالي. ولم وزن الجسم من الفئران قبل HU (24.3 ± 2.9g) لا تراجع بشكل ملحوظ على الفور بعد 14D هو جين تاو (22.7 ± 1.9g) ، 28D هو جين تاو (21.3 + 2.1g) أو بعد 3 أيام الانتعاش (24.0 ± 1.8g) . النعلية كتلة العضلات انخفضت بشكل ملحوظ (-39.1 ٪ ، و -46.6 ٪) في أعقاب HU لمدة 14 يوما و 28 يوما على التوالي (P <0.001). بعد 3 أيام من الانتعاش الشامل النعلية زيادة كبيرة لتصل إلى 74 ٪ من قيم السيطرة. وأوزان الخليل الكظرية من الفئران لا تختلف بالمقارنة مع الفئران السيطرة.
ومما يدل على نجاح الرواية لدينا طريقة لصيانة HU من وزن جسم الحيوان ، مقارنة أوزان الغدة الكظرية ، وضمور النعلية التالية HU الموافق الأدب القيم المتوقعة 2 و 7 و 8. المزايا الرئيسية لهذا الأسلوب HU ما يلي : 1) سهولة فحص الذيل أثناء التعليق ، 2) انخفض احتمال ذيول مزرقة ، ملتهبة ، و / أو نخرية وحظ في كثير من الأحيان مع تسجيل الذيل وHU ، 3) أي إمكانية لمضغ الفئران الجر الشريط والخروج من جهاز التعليق ، و4) الانتعاش السريع والعادي النشاط قفص فورا بعد HU.
قبل الجراحة آلات / مواد
جراحة الداخلي
1. Hindlimb التفريغ الداخلي
المواد
قفص الإعداد
Hindlimb تفريغ ماوس
2. ممثل النتائج :
لإنشاء نجاح تقنية HU الذيل الدائري قمنا بقياس وزن الجسم الحيوان قبل الذيل جراحة الطوق ، وقبل وبعد هو والانتعاش ؛ النعلية كتلة العضلات ، والغدة الكظرية الشامل في جميع الفئات.
وتظهر وزن الجسم من الفئران في كافة مراحل التجربة في الشكل 1. وكان وزن الجسم من الفئران قبل عصابة الذيل لعملية جراحية (24.7 ± 3.5G) لا تختلف كثيرا بعد 5 أيام من التعافي من الجراحة عصابة الذيل (24.3 ± 2.9g) قبل هو جين تاو. ولم انخفاض وزن الجسم بشكل ملحوظ على الفور بعد 14 يوما من الخليل (22.7 ± 1.9g) ، و 28 يوما من الخليل (21.3 + 2.1g) أو بعد 3 أيام من الانتعاش HU (24.0 ± 1.8g) على الرغم من أن هو جين تاو الى 14 و 28 يوما أسفرت عن خسارة صغيرة (-6.8 ٪ و 12 ٪) ، ولكن غير مهمة في كتلة الجسم ، فإن الفئران تعافى تماما من ما كانت عليه قبل HU وزن الجسم بعد 3 ايام من الانتعاش. ويبين الاستهلاك الغذائي للفئران والجرذان السيطرة المتنقلة HU في الشكل 3. وكان متوسط الاستهلاك الغذائي اليومي لا تختلف في الفئران HU أكثر من 28 يوما مقارنة مع الضوابط.
لاحظنا ضمور العضلات الكبيرة النعلية HU التالية لمدة 14 و 28 يوما (-39.1 ٪ -46.6 ٪ و) التي تشير إلى إجراء HU فعالة (الشكل 2). وعلاوة على هذه الدرجة من ضمور يتسق مع القيم الأدب المتوقع لمدة 2-4 أسابيع من HU 2 ، 7 ، 8. بعد 3 أيام من التعافي من HU النعلية الشامل زيادة كبيرة لتصل إلى 74 ٪ من قيم السيطرة. وكان النعلية الشامل في مجموعة استرداد أكبر بكثير من الجماعات HU على حد سواء ، لكنها ما زالت أقل بكثير من الحيوانات السيطرة الخارجية.
تم قياس الأوزان الكظرية كمؤشر على التوتر الحيوان ، وكلاهما تم رفعه في الغدد الكظرية اليمنى واليسرى وزنه. وكان متوسط الأوزان مماثلة لمكافحة الفئران والجرذان HU في جميع الفئات (الشكل 4).
سبق لنا في الفئران أظهرت أن نسبة النجاح لعدد من الحيوانات في بداية HU بالمقارنة مع عدد من الحيوانات التي أنجزت HU دون الخروج من جهاز التعليق (بسبب مضغ الحيوانات من خلال الشريط الذيل الجر) وكان 10 من أصل من 12 باستخدام تقنية موري هولتون - 1. أي من الفئران (ن = 54) وجاء في هذه الدراسة من أي وقت مضى إلى أسفل من تعليق قبل الانتهاء من فترة هو جين تاو. فعلنا ومع ذلك ، واحد التي وضعت الماوس الذي ذيل ملتهبة بشدة. أزلنا عندما أصبح واضحا الالتهاب ، وخاتم الذيل للسماح للمنطقة ملتهبة للشفاء ، ووضع في وقت لاحق آخر الذيل الدائري لإكمال مدة HU.
في الماضي عندما يكون لدينا استخدام الأسلوب موري - هولتون هو جين تاو ، ونحن عادة القضاء على الفئران 02/01 / المجموعة لأنها تخرج من جهاز التعليق. مع أسلوب درب الحلقة لم يكن هناك من الفئران الحلقات المقبلة من دون قصد الجهاز هو جين تاو خلال الفترة من الخليل لمدة 14 أو 28 يوما (ن = 54 الفئران).

الرقم وزن الجسم 1. التغييرات (متوسط ± SD). الاختصارات : CON : الفئران الحاملة للتحكم في وزن الجسم (ن = 76) ؛ التمهيدية هو : كل الفئران قبل HU (ن = 54) ؛ HU14 : الفئران hindlimb تفرغ لمدة 14 يوما (ن = 34) ؛ HU28 : الفئران hindlimb لتفريغ 28 يوما (ن = 20) ؛ REC : الفئران hindlimb تفريغ يسمح لاسترداد قفص لمدة 3 أيام (ن = 22). لم يلاحظ أي اختلافات كبيرة في وزن الجسم بين المجموعات.

الرقم عضلة النعلية 2. ضمور (متوسط ± SD). الاختصارات : CON : الفئران الحاملة للتحكم في وزن الجسم (ن = 76) ؛ HU14 : الفئران hindlimb تفرغ لمدة 14 يوما (ن = 34) ؛ HU28 : الفئران hindlimb تفرغ لمدة 28 يوما (ن = 20) ، ونادي السباق والفروسية : الفئران hindlimb تفريغ سمحت لاسترداد قفص لمدة 3 أيام (ن = 22). * تختلف اختلافا كبيرا (ع <0.001) من تحمل الوزن التحكم (CON). δSignificantly مختلفة (ع <0.01) من المجموعات HU على حد سواء.
467fig3.jpg "بديل =" الشكل 3 "/>
استهلاك الأغذية الرقم 3 (متوسط ± SD). متوسط الاستهلاك الغذائي اليومي (غ / يوم) خلال تحمل الوزن وتفريغ hindlimb. الاختصارات : الفئران الحاملة للتحكم في وزن الجسم (ن = 76) ؛ HU : الفئران hindlimb unloaded14 -- 28 يوما. لم يلاحظ أي فروق ذات دلالة إحصائية بين المجموعات وCON هو جين تاو.

الشكل 4. القداس الكظرية (متوسط ± SD). الاختصارات : CON : الفئران الحاملة للتحكم في وزن الجسم (ن = 76) ؛ HU14 : الفئران hindlimb تفرغ لمدة 14 يوما (ن = 34) ؛ HU28 : الفئران hindlimb تفرغ لمدة 28 يوما (ن = 20) ، ونادي السباق والفروسية : الفئران hindlimb تفريغ سمحت لاسترداد قفص لمدة 3 أيام (ن = 22). لم يلاحظ أي اختلافات كبيرة بين المجموعتين.
قمنا بتقييم أسلوب بديل من الفئران hindlimb التفريغ ، ونحن مصممون على أن تكون ناجحة للغاية. وقد استخدم الأسلوب الدائري الذيل كما هو موضح هنا للتعليق hindlimb طويلة الأجل ، ودراسة HU الانتعاش التالية. تحت كل هذه الظروف ، لم يكن هناك أي دليل على الفشل في التكيف كما يتضح من تناول الأغذية مستقرة ، ووزن الجسم ، والأوزان الكظرية للفئران. هذه التقنية HU الذيل عصابة من السهل القيام بها ويمكن بسهولة أن تدمج مع الممارسة الجراحية القليل جدا.
هناك العديد من المزايا من الذيل الدائري أسلوب مقارنة بالطريقة التقليدية 6 - موري هولتون 5. أولا ، والجلد وخاتم موقع غرس على هذا الذيل دائما مرئية ، حتى إذا تنشأ مشاكل يتضح على الفور ، وليس فقط في نهاية فترة التعليق. الثانية ، والحيوانات ليست قادرة على الخروج من جهاز التعليق في أي وقت خلال HU ، تنتفي الحاجة إلى اتخاذ قرار ما إذا كان للحفاظ على الماوس أو ليست في مجموعة بيانات. وعلاوة على ذلك ، فإن الفئران لا يزعج جهاز الرنين وعندما يتم اطلاق سراحهم من HU للانتعاش ، لا تعبث مع ذيولها ، والسماح لمرحلة الانتعاش التالية السلس هو جين تاو. أخيرا ، والفئران تفريغ hindlimb مع أسلوب الذيل الدائري الحفاظ على وزن الجسم بشكل أفضل من الفئران hindlimb تفريغها بواسطة تقنية الذيل الجر موري - هولتون. في ايدينا بعد 14 يوما من HU احظنا خسارة صغيرة (-6.8 ٪) ، ولكن غير مهمة في كتلة الجسم. بينما لاحظ آخرون إينغلس. انخفاضا كبيرا في -12 ٪ من وزن الجسم في الفئران بعد 14 يوما من HU بواسطة الأسلوب موري هولتون - 3. على الرغم من أن التقرير لم إينغلس الأوزان الكظرية ، ويبدو أن لدينا الذيل الدائري أسلوب يمنح أقل من الضغط على الفأرة (أوزان الفئران في الغدة الكظرية هو جين تاو ان لا تختلف من الضوابط) وصيانة أفضل من وزن الجسم خلال فترة hindlimb التفريغ.
باختصار ، تم تطوير أسلوب عصابة الذيل تفريغ hindlimb واختباره على الفئران لHU 14 و 28 يوما ، وعلى الفئران عاد الى الانتعاش قفص لمدة 3 أيام بعد HU. على أساس الأوزان الكظرية ، وكتلة الجسم وتناول الطعام ، ويبدو أن الفئران تكيفت جيدا لجهاز الذيل الدائري. وhindlimb الذيل الدائري تفريغ الأسلوب هو مفيد وبسيط لالبديلة التقليدية موري - هولتون تقنية التفريغ hindlimb.
فإن الكتاب أود أن أشكر أندرو جونسون دان ، وهو طالب البحوث الجامعية البارزة في المختبر لدينا ، للحصول على المساعدة الفنية له ورعاية الحيوانات. بتمويل من المعهد الوطني للصحة منح HD058834 وجامعة ميسوري للعلوم زمالة الحياة هذا العمل.
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| قاطعة أسلاك/كماشة | Ace Hardware | 84-056 | |
| شاش | Fisher Scientific | 22-037-901 | |
| وسادة تدفئة | Sunbeam | Z-1228-001 | |
| أدوات تطبيق نترات الفضة | ARZOL | 0001-2 | |
| Isoflurane,USP | Novaplus | NDC 0409-3292-49 | |
| جلوكونات الكلورهيكسيدين 4% | Purdue Products L.P. | NDC 67618-200-01 | |
| خيط جراحي فولاذي معقم 2-0 | Ethicon Inc. | SS-28 | |
| إبرة مقاس 25 X 5/8 A gauge | Terumo Medical Corp. | NN 2516R | |
| ملقط مرقئ/حامل إبر | Fine Science Tools | 12500-12 | |
| براغي آلات مقاس 10-24 X 4 | Hillman The Fastener Center | 90272 | |
| صامولة قفل نايلون مقاس 10 X 24 | Hillman The Fastener Center | 180141 | |
| صامولة مجنحة مقاس 10 X 24 | Hillman The Fastener Center | 180243 | |
| حلقة تثبيت (واشر) مقاس ¼ X 1 | Hillman The Fastener Center | 290012 | |
| مدور صيد مع خطاف سريع مقاس #6، 1-11/16” | Bass Pro Shop | 38-481-554-01 | |
| مكوك ماكينة خياطة معدني | Singer Instruments | 45785 | |
| مشبك ورق | Office Depot | 221720 | |
| ملاقط أوراق سوداء مقاس 2” | Office Depot | 308957 | |
| شريط لاصق متعدد الاستخدامات Scotch | Office Depot | 790710 | |
| قضيب فولاذي مطلي ومشقوق مقاس 1-3/8” | Home Depot | 548932 | يمتد قليلاً بعد الطول الكامل للقفص |
| قفص 50cm X 40cm X 20cm (قفص جرذان) | Alternative Design Manufacturing | RC88D-PC | |
| زجاجة مياه | Alternative Design Manufacturing | WB16FS | |
| سلك فولاذي مقاوم للصدأ | Small Parts, Inc. | SWX-4029 | سلك على شكل حرف U لدعم زجاجة المياه |
طلب إذن لإعادة استخدام النص أو الأشكال في مقالة JoVE هذه
طلب إذن