وقد ثبت RNA التدخل الفعال للغاية لتحليل الجينات في وظيفة ذبابة الفاكهة التنمية القصبة الهوائية. ويوضح بروتوكول مفصلة المستخدمة من قبل مختبر جيانج لحقن الرنا المزدوج الجديلة في الأجنة يطير إلى التعبير الجيني ضربة قاضية. هذا الأسلوب لديه القدرة على فحص الجينات اللازمة للتنمية الأنسجة والأعضاء في ذبابة الفاكهة.
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
مقالة منهجية
رني التدخل عن طريق الحقن في الرنا المزدوج الجديلة ذبابة الفاكهة الأجنة
في هذه المقالة
ملخص
الملخص
الفحص الجيني هي واحدة من أقوى الوسائل المتاحة لاكتساب نظرة ثاقبة عملية بيولوجية معقدة 1. على مر السنين وأصبحت العديد من التحسينات وأدوات للتلاعب الجيني المتاحة في ذبابة الفاكهة 2. بعد وقت قصير من الاكتشاف الأولي Frie وميلو 3 التي يمكن استخدامها RNA المزدوج تقطعت بهم السبل لضربة قاضية في نشاط الجينات الفردية في ايليجانس انواع معينة ، وقد تبين تدخل الحمض النووي الريبي (رني) لتوفير منهج قوي الجينية العكسية لتحليل وظائف الجينات في تطوير الجهاز ذبابة الفاكهة 4 ، 5.
وتتكون العديد من الأجهزة ، بما في ذلك الرئة والكلى والكبد والأوعية الدموية ، أنبوبي من شبكات متفرعة أن السوائل أو الغازات الحيوية النقل 6 ، 7. تحليل تشكيل ذبابة الفاكهة القصبة الهوائية يوفر نظام نموذجا ممتازا لدراسة التشكل الأجهزة الأخرى 8 أنبوبي. كشفت ذبابة الفاكهة بيركلي مشروع الجينوم مئات الجينات التي يتم التعبير عنها في النظام القصبة الهوائية. لدراسة الآلية الجزيئية والخلوية تشكيل الأنبوب ، فإن التحدي يكمن في فهم دور هذه الجينات في عملية التنمية القصبة الهوائية. هنا ، نحن وصف مفصل لطريقة حقن الرنا المزدوج الجديلة في جنين ذبابة الفاكهة في التعبير ضربة قاضية الجينات الفردية. نحن أفلحت أسفل الذاتية dysfusion التعبير الجيني (dys) الرنا المزدوج الجديلة عن طريق الحقن. Dys هو بروتين bHLH لتقييم الأداء وأعرب في خلايا الانصهار القصبة الهوائية ، وكان مطلوبا للاندماج فرع القصبة الهوائية 9 و 10. dys - رني القضاء عليها كليا التعبير dys وأسفرت عيب الانصهار القصبة الهوائية. هذه طريقة بسيطة نسبيا يوفر أداة لتحديد الجينات لrequried tissure وتطوير الجهاز في ذبابة الفاكهة.
البروتوكول
1. كوكتيل الجنين
- إنشاء الأقفاص عند 25 درجة مئوية ويتم تغيير باستخدام 2-4 يوما ث عصير flies.Grape 1118 لوحات في كل ساعة خلال اليوم لمزامنة جمع البيض خلال فترة 1-2 أيام قبل جمع
- جمع الأجنة ل1hr عند 25 درجة مئوية
- قطع قطعة مستطيلة من آغار عصير العنب ، وقطع خفيفة في منتصف بشفرة الحلاقة ، وترك سطر في أجار
- استخدام مجس معدني لنقل الأجنة لوحة من عصير العنب لديك قطعة من عصير العنب آغار ، خط ....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المناقشة
طريقة حقن الرنا المزدوج الجديلة الحاضر هنا يمكن تحليل حساسة جدا وسريعة وظيفة الجينات في تطوير ذبابة الفاكهة القصبة الهوائية. ومن الممكن أن تطبق هذه الطريقة لتحليل وظيفة الجين على الأنسجة الأخرى ، وتطوير الجهاز.
....الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
الإفصاحات
الإعلان عن أي تضارب في المصالح.
شكر وتقدير
فإن الكتاب أود أن أشكر ستيفن لطواقم dysfusion الضد ، [كدنا] Dys والذباب 1118 ث.
....الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المواد
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| زيت الهالوكربون 700 | Sigma-Aldrich | H8898 | |
| مضخة بيكوسبريتزر III الدقيقة | Parker Hannifin Corporation | 051-0500-900 | |
| ماصات دقيقة | Fisher Scientific | 21170M | |
| أدوات تعبئة الماصات الدقيقة | Eppendorf | 930001007 |
المراجع
- St Johnston, D., Nusslein-Volhard, C. The origin of pattern and polarity in the Drosophila embryo. Cell. 68, 201-219 (1992).
- Venken, K. J., Bellen, H. J. Emerging technologies for gene manipulation in Drosophila melanogaster. Nat. Rev. Genet. 6, 167-178 (2005).
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
إعادة الطباعة والأذونات
