وكان غير المستوعبة للقاذورات المونولاير PEG سيلاني من أقطاب ITO عنونة فردية على الزجاج بواسطة تطبيق التخفيض المحتملة. الكهروكيميائية تجريد الربط بين طبقة من سيلاني microelectrodes ITO يسمح للالتصاق الخلايا لتأخذ مكان بطريقة محددة مكانيا ، مع الأنماط الخلوية المقابلة بشكل وثيق لأنماط الكهربائي.
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
مقالة منهجية
الزخرفة على خلايا شفافة بصريا أقطاب إنديوم أكسيد القصدير
في هذه المقالة
ملخص
الملخص
القدرة على ممارسة تحكم دقيق المكانية والزمانية على سطح الخلية التفاعلات شرطا مسبقا هاما لتجميع متعددة الخلايا يبني بوصفه يحاكي في المختبر من أنسجة الأم. في هذه الدراسة ، تم استخدام تقنيات الحفر والطباعة الحجرية التصويرية الرطب الى افتعال عنونة فردية الإنديوم أكسيد القصدير (ITO) الأقطاب الكهربائية على ركائز الزجاج. تم تعديل ركائز زجاجية تحتوي microelectrodes ITO مع بولي (جلايكول الإثيلين) (PEG) سيلاني لجعلها خلية البروتين ومقاوم. تم التحقق من وجود جزيئات PEG عازلة على سطح القطب بواسطة voltammetry دوري فيري سيانيد البوتاسيوم يعمل كناقل مراسل الأكسدة. الأهم ، وتطبيق التخفيض المحتملة الناجمة الامتزاز طبقة الربط ، مما أدى إلى تجديد سطح القطب موصل ومظهر من قمم نموذجية الأكسدة فيري سيانيد. تطبيق التخفيض المحتمل أيضا أن يقابل التحول من خصائص القطب ITO من خلية غير لاصقة لاصقة الخلية. الكهروكيميائية تجريد الربط بين طبقة من سيلاني microelectrodes ITO يسمح للالتصاق الخلايا لتأخذ مكان بطريقة محددة مكانيا ، مع الأنماط الخلوية المقابلة بشكل وثيق لأنماط الكهربائي. وقد تجلى Micropatterning من أنواع الخلايا على عدة ركائز هذه. في المستقبل ، فإن السيطرة على خصائص biointerfacial التي يوفرها هذا الأسلوب يسمح للمهندس microenvironments الخلوية من خلال تجميع أنواع الخلايا ثلاثة أو أكثر في التكوين الهندسي الدقيق على ركيزة شفافة بصريا.
البروتوكول
الجزء الأول : الزخرفه من الأقطاب
- وقد تم طلاء وتنظيف شرائح المجففة ITO الزجاج المطلي مع مقاومة للضوء إيجابي
- وكان يخبز على السطح عند 100 درجة مئوية لإزالة المذيبات من مقاومة
- بعد الخبز ، وكان يتعرض للأشعة فوق البنفسجية السطحية من خلال استخدام قناع الضوئية الرئيسية كانون أليجنر
- أزيلت في المناطق التي تعرضت الى حل المطور
- وكان من الصعب خبز السطح لإزالة أي حل المطور المتبقية
- وكان محفورا في المناطق ITO لا تحميها الزخرفة مقاوم الضوء بعيدا في حامض ضوئي
- تمت إزالة ما تبقى من مقاومة للضوء sonicating في الأسيتون لتشكيل أقطاب ITO
الجزء الثاني : تعديل السطح
- يتم تنظيفها أقطاب تعديل في غرفة البلازما والربط مع تعديل 2 ٪ سيلاني في التولوين. ويتم من الحضانة لمدة 2 ساعة ، يليه 2 ساعة من الخبز.
ملاحظة : تتم هذه العملية في حقيبة مليئة النيتروجين القفازات لتجنب وجود الرطوبة ، والربط سيلاني هو رد الفعل تجاهها.
الجزء الثالث : الكيمياء الكهربائية
- وترد أسلاك الصلب إلى منصات الكهربائي.
- يتم وضع الأقطاب سيلاني PEG تعديل في خلية الكهروكيميائية لتنفيذ تجارب كهربائية.
- وجردت PEG سيلاني من مناطق مترابطة باستخدام نظام الكهربائي في ثلاثة PBS.
الجزء الرابع : الخلية الزخرفة
- يتم تحضين الليفية مع ركائز جردت مؤخرا. على الحضانة ، وهذه الخلايا نعلق على المناطق سيلاني PEG تجريد ، ولكن الخلايا لا ربط أي مكان آخر على سطح الأرض.
- يتم تحضين خلايا منقوشة في وسائل الإعلام الجديدة وتصور باستخدام المجهر.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المناقشة
في هذا الفيديو ، لقد أثبتنا في الزخرفة على الخلية شفافة بصريا أقطاب الإنديوم أكسيد القصدير. بعد افتعال الأقطاب ITO باستخدام ضوئيه ، تم تعديلها مع أحادي الطبقة من الخلايا مقاوم PEG سيلاني. وكان هذا المستوعبة المونولاير الكهربائية باستخدام تبديل سطح مقاوم من خلية إلى خلية لاصقة. وقد تبين من الزخرفة الليفية 3T3 الفئران في شريط فيديو له. لدينا أيضا الزخرفة خلايا الكبد والخلايا الأولية ، والخلايا النجمية باستخدام التقنية نفسها. بالإضافة إلى ذلك ، من خلال جعل الفرد أقطاب متعددة ، يمكننا توسيع نطاق هذه التقن...
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المواد
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات | |
|---|---|---|---|---|
| أكسيد الإنديوم والقصدير | أخرى | Delta Technologies | CB 40IN | |
| PEG silane | كاشف | Gelest Inc. | SIM6492.66 | |
| حمض الهيدروكلوريك | كاشف | Sigma-Aldrich | 320331 | |
| حمض النتريك | كاشف | Sigma-Aldrich | 258121 | |
| إيثانول | كاشف | Sigma-Aldrich | 459836 | |
| أسيتون | كاشف | Sigma-Aldrich | 650501 | |
| تولوين | كاشف | Sigma-Aldrich | 34866 | |
| وسط غذائي | كاشف | Invitrogen | ||
| كولاجين | كاشف | Sigma-Aldrich | C3867 | |
| خلايا أرومة ليفية فئرانية 3T3 | خط خلوي | ATCC |
المراجع
- Lee, J. Y., Jones, C., Zern, M. A., Revzin, A. Analysis of Local Tissue-Specific Gene Expression in Cellular Micropatterns. Analytical Chemistry. 78, 8305-8312 (2006).
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
إعادة الطباعة والأذونات
الوسوم
