Method Article

عد الخلايا الجذعية العصبية البشرية

DOI:

10.3791/262

⸱

August 22nd, 2007

 , 
1Department of Pathology, University of California, Irvine (UCI)

In This Article

Summary

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

مطلوب معرفة العدد الدقيق للخلايا قابلة للحياة لكثير من التلاعب زراعة الأنسجة. هذا البروتوكول يصف كيفية التفريق بين الخلايا الحية والميتة وتحديد الخلايا باستخدام عدادة الكريات. على الرغم من أنه يصف العد الجذعية العصبية البشرية / السلائف الخلايا (hNSPCs) ، ويمكن استخدامه لأنواع الخلايا الأخرى.

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

مطلوب معرفة العدد الدقيق للخلايا قابلة للحياة في حجم معين من الخلية لتعليق كثير من التلاعب الروتينية زراعة الأنسجة ، والخلايا مثل الطلاء لكيمياء سيتولوجية مناعية أو transfections الخلية. هذا البروتوكول يصف طريقة بسيطة وسريعة للتمييز بين الخلايا الحية والميتة وقياس تركيز الخلية ومجموع عدد الخلايا باستخدام عدادة الكريات. هذا الإجراء يتطلب أولا فصل الخلايا من النمو وإعادة التعليق السطحية لهم في وسائل الإعلام. المقبل ، وتضعف الخلايا في محلول أزرق التريبان (مثالي لتركيز من شأنها أن تعطي خلايا 20-50 في الربع) ووضعها في عدادة الكريات. أخيرا ، بلغ متوسط ​​بحساب الخلايا قابلة للتطبيق في العديد من الأرباع تم اختيارها عشوائيا ، وتقسيم متوسط ​​حجم رباعي واحدة 1 2 ملم (0.1 ميكرولتر) وضرب من قبل عامل التخفيف يعطي عدد من الخلايا لكل لتر. ضرب هذا التركيز من قبل الخلية في الحجم الكلي ميكرولتر يعطي إجمالي عدد الخلايا. يصف هذا البروتوكول العد الجذعية العصبية البشرية / السلائف الخلايا (hNSPCs) ، ولكن يمكن أن تستخدم أيضا لكثير من أنواع الخلايا الأخرى.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

الركض الخلايا الجذعية العصبية البشرية

ملاحظة : يرجى الرجوع إلى الإنسان الركض الخلايا الجذعية العصبية المقالة على كيفية فصل وresuspend الخلايا. https://www.jove.com/index/Details.stp؟ID=263

إعداد تعليق لخلية العد

  1. 25 مكان ميكرولتر من 0.4 ٪ حل التريبان الأزرق و 20 ميكرولتر من وسائل الإعلام ف....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Discussion

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

يصف هذا البروتوكول بطريقة مباشرة وسريعة لتحديد تركيز خلية لمجموعة متنوعة من التجارب التي تنطوي على الخلايا. باستخدام الاختصار الموصوفة في 3D ، ويمكن للمرء بسرعة وبدقة تحديد تركيز الخلية ومجموع عدد الخلايا في حجم معين.

....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Acknowledgements

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

فإن الكتاب أن نعترف الدكتور فيليب H. شوارتز من العصبية الوطنية الجذعية البشرية الموارد خلية في مستشفى الأطفال في ليالي ، أورانج كاونتي معهد البحوث لتوفير hNSPC الثقافات.

....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
أداةمقياس الدم بتباين الطورHausser Scientific02-671-54تم توزيعها بواسطة Fisher تحت الكتالوج المشار إليه #
Trypan Blue Stain 0.4٪ReagentGIBCO ، بواسطة Life Technologies15250-061تم توزيعها بواسطة Invitrogen تحت الكتالوج المشار إليه #

References

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Marchenko, S., Flanagan, L. A. Passaging Human Neural Stem Cells. Journal of Visualized Experiments. 7, http://www.jove.com/index/Details.stp?ID=263 (2007).
  2. Caprette, D. avidR. Using a Hemacytometer. BioEd Online. ,

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Hemacytometer CountingTrypan Blue ExclusionCell Viability AssayHuman Neural Stem CellsCell Concentration CalculationDilution Factor MethodPhase Contrast MicroscopyLive Dead Cell DifferentiationCell Suspension PreparationQuadrant Cell Counting

Related Articles