Method Article

التصوير C. ايليجانس الأجنة باستخدام مجهر Epifluorescent وبرمجيات المصدر المفتوح

DOI:

10.3791/2625

⸱

March 24th, 2011

 , 
1Human Genetics, University of Michigan

In This Article

Summary

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

و C. ايليجانس الجنين هو نظام قوي لدراسة بيولوجيا الخلايا والتنمية. نقدم بروتوكولا للتصوير حي ل C. ايليجانس استخدام أجنة البصريات مدينة دبي للإنترنت أو استخدام مضان المجاهر epifluorescent متاحة بسهولة والبرمجيات مفتوحة المصدر.

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

العمليات الخلوية ، مثل العزل الصبغي ، والتجمع ، والحرائك الخلوية ، هي بطبيعتها ديناميكية. الوقت الفاصل بين التصوير من الخلايا الحية ، وذلك باستخدام البروتينات الفلورية المسمى الصحفي أو الفرق المقابل تدخل (DIC) المجهري ، ويسمح لدراسة تطور الزمني لهذه الأحداث الديناميكية التي هي على خلاف ذلك يستدل من تحليل عينات 1،2 الثابتة. وعلاوة على ذلك ، ودراسة لوائح التنموية يتطلب إجراء العمليات الخلوية الوقت الفاصل بين التجارب على كائن حي سليمة خلال التنمية. الجنين ايليجانس Caenorhabiditis خفيفة وشفافة لها ، ثابتة السريع البرنامج الإنمائي مع خلية معروفة النسب 3 ، مما يوفر تجربة نموذج مثالي لدراسة المسائل في بيولوجيا الخلية والتنمية 4،5 6-9. جيم ايليجانس هو قابلة للتعديل الوراثي للتلاعب من قبل الوراثة إلى الأمام (على أساس الطفرات العشوائية 10،11) ، وعلم الوراثة العكسية لاستهداف جينات معينة (على أساس رني بوساطة التدخل واستهدفت الطفرات 12-15). بالإضافة ، يمكن بسهولة خلق حيوانات معدلة وراثيا في التعبير عن بروتينات أو الموسومة fluorescently صحفيين 16،17. هذه الصفات مجتمعة تجعل من السهل التعرف على المسارات الجينية التي تنظم العمليات الخلوية الأساسية والتنموية في الجسم الحي 18-21. في هذا البروتوكول نقدم أساليب التصوير المباشر لجيم ايليجانس أجنة باستخدام البصريات DIC أو مضان GFP على مجهر epifluorescent المجمع. نبدي السهولة التي يمكن أيضا المجاهر متاحة بسهولة ، وتستخدم عادة لتصوير نموذج ثابت ، تطبق على الوقت الفاصل بين التحليل باستخدام برمجيات المصدر المفتوح لأتمتة عملية التصوير.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

دودة التحضير

  1. L4 الديدان نقل اليرقات لوحات مناسبة 18 24hrs قبل التصوير 22. وهذا ضمان لديك البويضة التي تحمل الكبار لتوفير إمدادات كافية من أجنة مبكرة.
  2. إعداد أنابيب من الفازلين وAgarose. نحن نستعد عدة 15mL أنابيب الصقر الفازلين قبل ذوبان في كوب في الميكروويف وصرفها في قسامة مل 4-5 في الأنبوب. تذوب بالمثل 2-3 ٪ (ث / ت) Agarose في الاحتياطي (أو M9 الاحتياطي البيض) و 4-5 مليلتر قسامة في أنابيب الصقر. يجب الحرص على عدم الإفراط في تغلي من أجل تقليل التبخر. في يوم من التصوير ، وتذوب 1 أنبوب من الفازلين في 65-70 ° C وكتلة حرارة تذيب 1 أنبوب agarose في الميكروويف ، مرة أخرى أن يكون حذرا للتقليل من الغليان. تخزين أنابيب في كتلة حرارية للحفاظ على وفازلين وAgarose في حالة منصهرة.
  3. جعل Agarose منصة. موقف شريحة المجهر جديدة بين الشرائح دليل 2 ، وهي الشرائح التي تغطيها طبقة واحدة من الشريط مختبر مشترك انضمت إلى أعلى وأسفل كل شريحة الدليل. استخدام ماصة باستور مع نهاية قطع لوضع 2-3 قطرات من Agarose ذاب على الشريحة الجديدة. مع تغطية عمودي الثانية الشريحة 2 إلى الشريحة الأصلية ، بحيث يغطي ويساعد على انتشار Agarose لخلق لوحة رقيقة مربع. وينبغي أن الشريحة الثانية 2 أعلاه بقية الشريط دليل على الشرائح. ويمكن زيادة تركيز Agarose إلى 5 ٪ لمنصات سمكا.
  4. تستخدم على نطاق وتشريح سلك البلاتين "بيك" ، والديدان نقل البالغين من 2 إلى انخفاض 9 12μL من الاحتياطي M9 أو البيض على 18 مم X ساترة 18 مم.
  5. قطع الديدان مفتوحة مع إبرة (نستخدم 27G1 / 2 الإبر) أو مشرط للافراج عن الأجنة. في محاولة لخفض في منتصف الدودة.
  6. انخفاض Agarose سادة (مع الجانب آغار أسفل) على ساترة 18x18 ملم تحتوي على الأجنة. آغار تقليم تمتد من حافة الانزلاق تغطية بشفرة حلاقة.
  7. ختم ساترة باستخدام الفرشاة أو عصا خشبية رقيقة لتطبيق الفازلين ذاب لجميع الحواف أربعة من ساترة.

بديل ليتصاعد آغار معلقة قطرات 23 إذا الأجنة عرضة للضغوط (أي إذا قشرة البيضة لا تشكل بشكل صحيح). ويمكن أيضا أن يتم تنفيذ التصوير في الرحم أو الإخصاب لمتابعة الأحداث في وقت مبكر مثل الانقسام الاختزالي. وينبغي أن تكون الديدان مع تخدير Levamisole 24. من أجل زيادة عدد الأجنة في مرحلة معينة من التطور ، يمكن تشريح الديدان عدة في وقت واحد ووضع الأجنة معا باستخدام بلطف تلميح غرامة ماصة أو فرشاة رموش العين أو عن طريق الفم pipetting.

4D Nomarski مدينة دبي للإنترنت (على النقيض من التدخل التفاضلية) أفلام

  1. بدوره على المجهر BX61 أوليمبوس. لأن كاميرا حساسة للموجات EM المنبعثة من الأجهزة الأخرى التي يتم تشغيله لأول مرة مشاركة لمبة الزئبق (إذا كان ذلك ضروريا لGFP أو مضان). بدء الصغرى ، مدير مرة واحدة على كل شيء. اختيار ملف التكوين المناسب للتصوير DIC أو الفلورسنت. الفرق الرئيسي هو أن الملف لا يتضمن DIC السيطرة على مصراع الفلورسنت. كما يختار كل ملف المكعب المناسبة التصفية ووضع الكاميرا كسب.
  2. العثور على أجنة باستخدام المجهر الهدف 10X. تبدو بالقرب من الهيئات دودة لمجموعات من الشباب في الأجنة من أجل الحصول على أجنة متعددة ضمن حقل التصوير. تجنب الأجنة داخل دودة للحصول على أفضل الصور.
  3. باستخدام التبديل البرمجيات لأعلى التكبير (40X ل100X) والقرار (NA 0،9-1،4) الهدف للتصوير.
  4. ضبط Nomarski DIC علم البصريات (ومواقع الويب التالية تحتوي على شرح مفيد للبصريات مدينة دبي للإنترنت والمصطلحات ؛ http://www.olympusmicro.com/primer/techniques/dic/dichome.html
    http://microscopy.berkeley.edu/Resources/instruction/DIC.html)
    1. على BX61 أوليمبوس لدينا عناصر مهمة هي :
      1. المستقطب -- التمرير تحت مكثف
      2. المكثف ولاستون بريزم -- برج على المكثف ، وأقل بقليل من المرحلة.
      3. الهدف ولاستون بريزم -- التمرير تحت التصفية مكعبات
      4. 2 المقطب الثاني (محلل) -- تصفية مكعب في موقف مدينة دبي للإنترنت
    2. التبديل مكعب تصفية لمدينة دبي للإنترنت لموقف محلل (2 المستقطب الثاني) في مسار الضوء (البرمجيات يجب القيام بذلك على بدء).
    3. تأكد من أن يتم محاذاة بشكل صحيح المستقطبات اثنين (عبر). عندما تكون كل المناشير وولاستون خارج مسار الضوء يجب أن يكون مجال الرؤية المظلمة. إذا لزم الأمر ، تدوير المستقطب تحت مكثف حتى هذا هو الصحيح.
    4. إدراج بريزم الهدف ولاستون (العلوي) في مسار الضوء.
    5. تدوير البرج على المكثف لتحديد المنشور ولاستون يطابق الهدف الذي تستخدمه.
    6. ضبط التمرير تحت هذا البرج لمباراة NA العدسة.
    7. التركيز المكثف لإضاءة كوهلر الأمثل.
    8. ضبط العلوي ولاستون الحزب الثوري المؤسسيخ للحصول على النقيض الأمثل من خلال تناوب على مقبض الباب المنزلق.
    9. الإعدادات الأخرى التي تسيطر عليها بدء تشغيل برنامج الكاميرا وتشمل كسب (مجموعة إلى 0) والتحول إلى حفظ الملفات وليس 8 بت ملفات TIFF 16 بت.
  5. ضبط مستوى الضوء لإعطاء صورة جميلة. (وعادة ما يستخدم 4،7 فولت) (الخاضعة للرقابة عبر البرامج). نحن نفضل أن تلقي الضوء على عينة بحيث ألمع بكسل ليست سوى أقل من مستويات التشبع.
    دبي انترناشيونال كابيتال نتائج جيدة البصريات في صورة مع نظرة 3 الابعاد حيث حبيبات الصفار في الجنين تبرز بشكل واضح. بدلا من ذلك يمكن وصف ذلك بأنه إذا كان الضوء يسلط الضوء على نموذج ويبدو أن تألق من زاوية بحيث يضيء جانب واحد من العينة (أو ميزات في العينة) الزاهية والجانب الآخر هو في الظل ، ويبدو أكثر قتامة.
  6. حدد منطقة سياحية (ROI) لتشمل الأجنة تريد صورة ، انقر فوق الزر تعيين دوروا للحد من النافذة.
  7. فتح نافذة اقتناء متعددة الأبعاد. حدد Z - المداخن (شرائح) ونقاط من الزمن.
  8. استخدام المجهر مقبض التركيز على العثور على الجزء السفلي من الجنين (البؤري الماضي مع بعض حبيبات الصفار في التركيز). انقر على أسفل الإختيار. أكرر لتحديد وتعيين رأس الجنين. نستخدم عادة 1 ميكرون وحجم الخطوة في نهاية المطاف مع 20 ~ طائرات التنسيق. نجمعها عموما طائرات التنسيق متعددة في كل نقطة زمنية لأن الأجنة والخلايا سميكة نسبيا. بالإضافة خصوصا عندما تبدأ الخلايا في الانقسام إلى توجهات مختلفة يمكن أن تحل محل خلايا أخرى حول الجنين في التحرك في الطائرة أو من التنسيق الأصلي. إذا المجهر الخاص لا يملك المحرك التركيز يمكنك ضبط التركيز يدويا لمتابعة عملية الخلية أو كنت مهتما.
  9. عدد المدخلات اللازمة من النقاط والوقت الفاصل الزمني. نستخدم عادة 15 ثانية الفاصل الزمني وتحديد الحد الأقصى من النقاط الزمنية 500. نبدأ مع نقاط وقتا أكثر مما سنحتاج ووقف عند اقتناء المطلوب. إذا كنت التصوير طائرات التنسيق متعددة ، تأكد من وجود ما يكفي من الوقت للحصول على جميع طائرات التنسيق في الفترة الفاصلة بين نقاط الوقت.
  10. حدد أو إنشاء موقع لحفظ البيانات. تأكد من أنه تم إعداد برنامج لعرض الصورة الأخيرة فقط. إعطاء الملف اسما واكتساب فوق. رصد الحصول على الصور الآلي لنقاط الوقت القليلة الأولى لضمان انها تعمل بشكل صحيح.
  11. انقر فوق التوقف عندما كنت ترغب في التوقف عن اقتناء ، والتحول إلى هدف 10x وإعداد الشريحة التالية.
  12. عندما يتم التصوير إزالة مكونات مدينة دبي للإنترنت من مسار الضوء. تنظيف النفط قبالة الهدف إذا لزم الأمر. بدوره قبالة كل شيء بدءا من الكاميرا.

أفلام GFP

  1. بدء المجهر والعثور على الأجنة على النحو الوارد أعلاه. استخدام ملف التكوين التي تشمل مراقبة البرامج من مصراع الفلورسنت.
  2. تأكد من أن المنشور العلوي مدينة دبي للإنترنت (المنزلق) ليست في مسار الضوء.
  3. التبديل مكعب لتصفية FITC / GFP (مجموعة تلقائيا عند بدء التشغيل)
  4. تغيير كسب الكاميرا إلى 255 وملف الصورة إلى 16 بت المشاجرة (مجموعة تلقائيا عند بدء التشغيل مع هذا الملف التكوين).
  5. إيقاف الضوء الأبيض.
  6. التصوير فوق لايف لصورة المعاينة. العمل بسرعة للحد من التعرض للضوء. بدلا من استخدام صورة لجمع التقط صورة واحدة.
  7. ضبط الزئبق الطاقة لمبة / مرشحات الكثافة محايدة ، وطول التعرض للحصول على صورة جيدة. عموما ، يجب استخدام الحد الأدنى من الوصول إلى ضوء نموذج للحصول على البيانات التي تريد تقليص photodamage إلى الخلية وphotobleaching إشارات مضان.
  8. إعداد الفاصل الزمني ، وعدد من النقاط الزمنية وعدد من طائرات التنسيق. نحن غالبا ما تستخدم فترات second 10/05 وطائرة الوصل 1-3.
  9. تحديد العائد على الاستثمار وتعيين المعلمات من أجل الحصول على الصور كما هو موضح سابقا في خطوات 13-19.

تحليل الأفلام

  1. سيتم حفظ البيانات إلى مجلد يحمل الاسم الذي أدخلته وتحتوي على سلسلة من ملفات TIFF لكل صورة من المكدس 4D ، ملف نص والفوقية التي تحتوي على ملف xml مثل مستويات التعرض والفواصل الزمنية.
  2. يمكن فتح الصور بواسطة شجار ImageJ عبر طريقتين. أول (أسلوب) هو أبسط ، وسوف أيضا قراءة البيانات الوصفية من كل ملف. الثانية (أسلوب ب) قادرا على استخدام الذاكرة الظاهرية لفتح الملفات التي تكون أكبر من حجم الذاكرة المخصصة لImageJ ، لكنها لا تتضمن البيانات الوصفية.
    1. باستخدام الصغرى ، مدير البرنامج المساعد
      1. هو مبني على مدير الدقيقة ويستخدم ImageJ (تثبيته نسخة جديدة من ImageJ التي ستكون مختلفة عن أي إصدار الأخرى التي قد تكون قمت بتثبيتها سابقا) ويتضمن البرنامج المساعد لفتح البيانات. بدلا من ذلك يمكنك نسخ محتويات المجلد إلى المجلد Micro-Manager-1.3/plugins المحمول لإصدار آخر من ImageJ.
      2. انتقل إلى القائمة الإضافات ، حدد مدير الصغرى ، ومن ثم فتح ملف الصغرى ، مدير.
      3. حدد المجلد الذي يحتوي على البيانات التي ترغب في عرضها ، ثم انقر فوق موافق.
      4. اللعب من خلال أبعاد Z و T.
    2. به الامكنه plugin لفتح الأفلام مع مستورد BioFormats.
      1. نقل xml وملفات txt من المجلد الذي يحتوي على ملفات TIFF ، وإعادة تسمية الملفين لتطابق اسم مجموعة البيانات.
      2. في غضون ImageJ ، انتقل إلى الإضافات المنسدلة القائمة ، حدد مواضع ومستعرض ثم إما بيانات أو تنسيقات بيو للمستورد.
      3. العثور على مجلد مع مداخن شجار الخاص. انقر على ملف TIFF أولا ، ثم فتح.
      4. عرض المكدس مع Hyperstack. في إطار المنظمة مجموعة بيانات : اختر مجموعة ملفات ذات أبعاد علوي أسماء مشابهة ، وفتح جميع السلسلة. تحت إدارة الذاكرة : اختر : استخدام المكدس الظاهري (خاصة بالنسبة للمجموعات البيانات الكبيرة). انقر فوق موافق
      5. فإن البرنامج المساعد تحديد أبعاد مجموعة البيانات (# نقاط الوقت وطائرات التنسيق) وعرض يتراوح بين مجموعة من الأقواس> <. انقر فوق موافق أو تغيير عدد من النقاط الزمنية و / أو طائرات التنسيق لفتح.
      6. تأكيد البعد الذي يتوافق مع كل سلسلة.
      7. اللعب من خلال أبعاد Z و T.

ممثل النتائج

figure-protocol-1
الشكل 1. اللقطات من فيلم DIC Nomarski توضح الأحداث الخلوية العادية خلال جيم المبكر ايليجانس تطور الجنين : الهجرة pronuclear (0-5:45) ، دوري الدرجة الاولى غير المتماثلة (6:45 حتي 14:45) والدرجة الثانية غير المتزامن (14:45-27:00). وقد تم جمع البيانات مع عدسة 60x NA 1.35. وقد تم جمع 20 طائرة الوصل على فترات ميكرون 1 كل 15 ثانية مع التعرض ميكروثانية 40. وكانت الصور استدارة بحيث الخلفي هو هو الحق وبطني أسفل. شريط النطاق تمثل 10 ميكرون.

figure-protocol-2
الشكل 2. اللقطات من فيلم الفلورسنت توضح الحركات الديناميكية لالوحيدات GFP المسمى من الكروموسوم معقدة الركاب (AIR - 2) موجودة على الكروموسومات من الطورية إلى طور الصعود في وقت مبكر (A إلى C) قبل الظهور على المغزل في طور الصعود midzone حتى الحرائك الخلوية اكتمال (C إلى واو). وقد تم جمع البيانات مع عدسة 60x NA 1.35. وقد تم جمع طائرة واحدة كل 10 ثانية التنسيق مع 50 μsec التعرض. وكانت الصور استدارة بحيث الخلفي على اليمين. شريط النطاق تمثل 10 ميكرون.

الفيلم السينمائي Nomarski 1 من البرية من نوع الجنين.
المقابلة الفيلم إلى الشكل 1. الخلفي هو إلى أسفل بطني ، والحق في أسفل اليسار. يظهر طائرة واحدة محورية في مجموعة البيانات الأصلية. وجمعت صورة كل 15 ثانية واللعب مرة أخرى يتم تعيين في 14 لقطة في الثانية. انقر هنا لمشاهدة الفيديو

الفيلم السينمائي نيون 2 من البرية من نوع الجنين معربا عن GFP : AIR - 2.
الموافق الشكل 2 الفيلم. الخلفي على اليمين العلوي. كما تم جمع الفيلم طائرة تنسيق واحد. وجمعت صورة كل 10 ثانية وتشغيل يتم تعيين في 14 لقطة في الثانية. انقر هنا لمشاهدة الفيديو

Discussion

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

وهناك اعتبار رئيسي للتصوير مرور الزمن يعيش هو الحفاظ على سلامتها وسلامة الخلية والكائن في. دبي انترناشيونال كابيتال المجهري يوفر الفوائد التي لم يتم كشفها نموذج للأشعة فوق البنفسجية والحرارة المفرطة من مصدر الإضاءة. هي مناسبة تماما للكشف المجهري DIC الهجرة الخلية ويتغير شكل الخلية مثل الحرائك الخلوية والتعرف على بعض الهياكل التحت خلوية ، مثل مغزل الإنقسامية والغشاء النووي. التصوير مضان من البروتينات مراسل يكمل المجهري مدينة دبي للإنترنت عن طريق تحديد الأجزاء التحت خلوية إضافية والسماح التصور للبروتينات محددة. للتخفيف من أخطار وأضرار الضيائية إلى الجنين أثناء التصوير مضان ، ونحن عادة زيادة الربح من الكاميرا الرقمية للتعويض عن انخفاض كثافة الأشعة فوق البنفسجية ومدة الإضاءة. خافت المعدلة وراثيا للصحفيين الفلورسنت ، خوارزميات deconvolution إلى إعادة تعيين من خارج تركيز الضوء أو deblurring خوارزميات للحد من الخلفية يمكن تحسين جودة الصور الملتقطة. بينما المجاهر المتقدمة مثل نظم مبائر multiphoton أو في بعض الأحيان ضرورية ، وجدنا أنه يمكن للصحفيين الفلورسنت تصوير العديد من استخدام هذا الإعداد epifluorescent المجهر ، مما أسفر عن صور ذات جودة عالية.

مدير الدقيقة (http://www.micro-manager.org) ، بالإضافة إلى كونها مجانية ، يحفظ الملفات مباشرة إلى تنسيق TIFF بدلا من تنسيقات الملفات الشخصية لكثير من حزم البرامج التجارية. هذا يبسط كثيرا من تحليلات البيانات المتوفرة لدينا من خلال القضاء على خطوة تحويل ملف اللازمة لقراءة ملفات الصور في ImageJ ، فوتوشوب وغيرها من برامج تحرير الصور.

Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
الإعلان عن أي تضارب في المصالح.

Acknowledgements

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

بدعم الصناديق المؤسسية الداخلية والبيولوجي برنامج علماء العلوم في جامعة ميشيغان هذا العمل.

Materials

اوليمبوس BX61 المجهر مع الكاميرا أوكرا - ER هاماماتسو. 10X فلوريت خطة (NA 0.3) وPlanAchromat 60x (NA 1.35) هدف العدسات

مدير الدقيقة 1.3.46 (http://www.micro-manager.org)

صورة J 1.43 (http://rsbweb.nih.gov/ij)

loci_tools.jar (http://www.loci.wisc.edu)

Agarose -- البيولوجيا الجزيئية / هلام الصف الكهربائي

مجهر شرائح الصيادين Superfrost / بلاس (كتالوج # 12-550-15)

مختبر الشريط (دليل فيشر # 15-901 السلسلة)

18 ملم x 18 ملم 1.5 # Coverslips

M9 (242 ملي KH 2 ص 4 ، 40 مم نا 2 هبو 4 ، 9 ملم ز كلوريد الصوديوم ، و 19 ملي NH 4 الكلورين MgSO 4)

(http://130.15.90.245/wormlab_recipe_book.htm).

البيض العازلة (118 ملي مول كلوريد الصوديوم ، و 48 ملي بوكل ، CaCl 2 مم 2 ، 2 مم MgCl 2 و 25 HEPES ملم ، ودرجة الحموضة 7.3) 25.

فازلين

فرشاة / عصا

شفرات حلاقة

حرارة كتلة

تشريح المجهر

الديدان 22

سلك البلاتين اختيار 22

27G1 / 2 دقيقة الإنزلاق الإبرة (بيكتون ديكنسون) أو مشرط صغير بشفرة

References

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Gerlich, D., Koch, B., Dupeux, F., Peters, J. M., Ellenberg, J. Live-cell imaging reveals a stable cohesin-chromatin interaction after but not before DNA replication. Curr Biol. 16, 1571-1578 (2006).
  2. Nabeshima, K. Dynamics of centromeres during metaphase-anaphase transition in fission yeast: Dis1 is implicated in force balance in metaphase bipolar spindle. Mol Biol Cell. 9, 3211-3225 (1998).
  3. Sulston, J. E., Schierenberg, E., White, J. G., Thomson, J. N. The embryonic cell lineage of the nematode Caenorhabditis elegans. Dev Biol. 100, 64-119 (1983).
  4. Oegema, K., Hyman, A. A. Cell division. WormBook. , 1-40 (2006).
  5. Heuvel, S. vanden Cell-cycle regulation. WormBook. , 1-16 (2005).
  6. Chisholm, A. D., Hardin, J. Epidermal morphogenesis. WormBook. , 1-22 (2005).
  7. Gonczy, P., Rose, L. S. Asymmetric cell division and axis formation in the embryo. WormBook. , 1-20 (2005).
  8. Nance, J., Lee, J. Y., Goldstein, B. Gastrulation in C. elegans. WormBook. , 1-13 (2005).
  9. Priess, J. R. Notch signaling in the C. elegans embryo. WormBook. , 1-16 (2005).
  10. Brenner, S. The genetics of Caenorhabditis elegans. Genetics. 77, 71-94 (1974).
  11. O'Connell, K. F., Leys, C. M., White, J. G. A genetic screen for temperature-sensitive cell-division mutants of Caenorhabditis elegans. Genetics. 149, 1303-1321 (1998).
  12. Fire, A. Potent and specific genetic interference by double-stranded RNA in Caenorhabditis elegans [see comments]. Nature. 391, 806-811 (1998).
  13. Jansen, G., Hazendonk, E., Thijssen, K. L., Plasterk, R. H. Reverse genetics by chemical mutagenesis in Caenorhabditis elegans. Nat Genet. 17, 119-121 (1997).
  14. Liu, L. X. High-throughput isolation of Caenorhabditis elegans deletion mutants. Genome Res. 9, 859-867 (1999).
  15. Bazopoulou, D., Tavernarakis, N. The NemaGENETAG initiative: large scale transposon insertion gene-tagging in Caenorhabditis elegans. Genetica. 137, 39-46 (2009).
  16. Praitis, V., Casey, E., Collar, D., Austin, J. Creation of low-copy integrated transgenic lines in Caenorhabditis elegans. Genetics. 157, 1217-1226 (2001).
  17. Stinchcomb, D. T., Shaw, J. E., Carr, S. H., Hirsh, D. Extrachromosomal DNA transformation of Caenorhabditis elegans. Mol Cell Biol. 5, 3484-3496 (1985).
  18. Piano, F., Schetter, A. J., Mangone, M., Stein, L., Kemphues, K. J. RNAi analysis of genes expressed in the ovary of Caenorhabditis elegans. Curr Biol. 10, 1619-1622 (2000).
  19. Gonczy, P. Functional genomic analysis of cell division in C. elegans using RNAi of genes on chromosome III. Nature. 408, 331-336 (2000).
  20. Sonnichsen, B. Full-genome RNAi profiling of early embryogenesis in Caenorhabditis elegans. Nature. 434, 462-469 (2005).
  21. Mohler, W. A., Isaacson, A. B. Imaging embryonic development in Caenorhabditis elegans. Cold Spring Harb Protoc. , (2010).
  22. Stiernagle, T. Maintenance of C. elegans. WormBook. , 1-11 (2006).
  23. Bembenek, J. N. Cortical granule exocytosis in C. elegans is regulated by cell cycle components including separase. Development. 134, 3837-3848 (2007).
  24. Poteryaev, D., Squirrell, J. M., Campbell, J. M., White, J. G., Spang, A. Involvement of the actin cytoskeleton and homotypic membrane fusion in ER dynamics in Caenorhabditis elegans. Mol Biol Cell. 16, 2139-2153 (2005).
  25. Bianchi, L., Driscoll, M. Culture of embryonic C. elegans cells for electrophysiological and pharmacological analyses. WormBook. , 1-15 (2006).

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

C Elegans EmbryosEpifluorescent MicroscopeDIC OpticsOpen Source SoftwareTime Lapse ImagingFluorescent MicroscopyMicroscope SetupImage AcquisitionLive Embryo ImagingGFP Fluorescence

Related Articles