وصفنا بروتوكولا للالتصنيع الدقيق للجهاز لتوليد ميكروفلويديك التدرج التي يمكن أن تولد التدرجات المكاني والزماني في المكروية محددة جيدا. في هذا النهج ، يمكن استخدام الجهاز لتوليد التدرج ميكروفلويديك لدراسة موجهة الهجرة الخلية ، الجنيني ، التئام الجروح ، وورم خبيث من السرطان.
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
مقالة منهجية
جهاز لتوليد التدرج ميكروفلويديك لبيولوجيا الخلية
في هذه المقالة
ملخص
الملخص
يوصف تصنيع وتشغيل جهاز لتوليد التدرج ميكروفلويديك لدراسة السلوك الخلوية. منصة ميكروفلويديك هي أداة تمكن التجريبية ، لأنه لا يمكن التعامل مع تدفقات السوائل بدقة ، وتمكين عالية الإنتاجية التجارب ، وتوليد تدرجات تركيز مستقرة قابلة للذوبان. مقارنة مع المولدات التقليدية التدرج ، وبولي (dimethylsiloxane) (PDMS) يمكن أن يستند إلى أجهزة ميكروفلويديك توليد تدرجات تركيز عوامل النمو المستقر للمع ملامح واضحة المعالم. هنا ، وضعنا بسيطة الانحدار توليد الأجهزة ميكروفلويديك مع ثلاثة مداخل منفصلة. ثلاثة في واحدة مجتمعة microchannels متناهية لتوليد تدرجات التركيز. وأكد على استقرار وشكل عامل النمو من خلال تدرجات isothyiocyanate فلوريسئين (FITC) ، ديكستران مع الوزن الجزيئي مماثلة لعامل نمو البشرة (EGF). باستخدام هذا الجهاز ميكروفلويديك ، أثبتنا أن الخلايا الليفية تتعرض لالتدرجات تركيز EGF هاجر نحو تركيزات أعلى. قيمت كميا التوجه اتجاهي للهجرة الخلية والحركة من الخلايا المهاجرة التي تتبع خلية التحليل. وبالتالي ، قد يكون هذا الجهاز التدرج توليد ميكروفلويديك مفيدا لدراسة وتحليل سلوك الخلايا المهاجرة.
البروتوكول
ألف التصنيع الدقيق للجهاز لتوليد التدرج ميكروفلويديك
- يتم التعامل مع رقاقة سيليكون مع البلازما الاكسجين التفاعلية (5 دقائق في 30W ، Harrick العلمية ونيويورك).
- مقاوم الضوء السلبية (SU - 8 50 ، Microchem ، MA) هي تدور مغلف بالمطاط في 1000 دورة في الدقيقة لمدة 1 دقيقة على رقاقة سيليكون.
- رقاقة لينة المخبوزة في 65 درجة مئوية لمدة 10 دقيقة وبعد ذلك في 95 درجة مئوية لمدة 30 دقيقة على موقد.
- يتعرض الر....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المناقشة
الخلايا المعرضة للتركيز التدرجات مستقرة EGF في جهاز ميكروفلويديك هاجر نحو تركيزات أعلى. وكان التحقيق في اتجاه الاتجاه الهجرة الخلية ، ومؤشر الكيميائي ، حركية الخلايا المهاجرة التي تتبع خلية التحليل. ولذلك ، يمكن لهذه المنصة التدرج توليد ميكروفلويديك مفيدا لدراسة الانبثاث السرطان ، مرحلة التطور الجنيني ، والتوجيه محور عصبي.
....الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المواد
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات | |
|---|---|---|---|---|
| Dextran-FITC | كاشف | Sigma-Aldrich | FD10S | ديكستران مقترن بإيزوثيوسيانات الفلوريسين (FITC) (10kD) |
| hr-EGF | Invitrogen | 13247-051 | عامل نمو البشرة البشري المؤتلف | |
| PDMS | K.R. Anderson Co. | 2065622 | بولي (ثنائي ميثيل سيلوكسان) (PDMS)، Dow Corning Sylgard 184 (8.6 lb) | |
| مقاوم ضوئي سلبي | MicroChem Corp. | SU-8 50 | ||
| رقاقة Si | رقاقة سيليكون، 4 بوصة | |||
| أطباق بتري | ||||
| أنابيب بولي إيثيلين | BD Biosciences | PE 20 | ||
| PBS | Invitrogen | |||
| فيبرونيكتين | ||||
| NIH 3T3 | خط خلوي | خلايا ليفية | ||
| مجهر مقلوب | Nikon Instruments | TE 2000 |
المراجع
- Jeon, N. L., Baskaran, H., Dertinger, S. K. W., Whitesides, G. M., Van de Water, L., Toner, M. Neutrophil chemotaxis in linear and complex gradients of interleukin-8 formed in a microfabricated device. Nat. Biotechnol. 20, 826-830 (2002).
- Lin, F., Nguyen, C. M., Wang, S. J., Saadi, W., Gross, S. P., Jeon, N. L.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
إعادة الطباعة والأذونات
الوسوم
