تمت مراجعة جميع الإجراءات التي تنطوي على نماذج حيوانية من قبل لجنة رعاية المؤسسية المحلية ومجلس المراجعة البيطرية JoVE.
فئة
1. السكن الأساسي للفئران
- ضع الفئران في أقفاص بلاستيكية ذات قيعان وجوانب صلبة ، وطبقة من الفراش الناعم ومواد التعشيش مثل تمزيق الورق. استخدم الفراش الذي يتكون من أكواز الذرة المقطعة أو نشارة الخشب ، وتأكد من تغيير الفراش بانتظام للصرف الصحي.
- توفير الوصول إلى الغذاء والماء بشكل خاص. يحتوي الجزء العلوي من القفص البلاستيكي على قادوس طعام. قم بتوزيع كريات طعام الفئران المصممة بشكل صحيح من قادوس الطعام وقم بتوفير موزع مياه. تأكد من أن الجزء العلوي من القفص يحتوي على فلتر هواء لحماية الفئران من الملوثات الخارجية.
- حافظ على إيقاعات الساعة البيولوجية الطبيعية للفئران باتباع دورة فاتحة وظلام مدتها 12 ساعة في منشأة الإسكان. قم بإجراء الاختبارات السلوكية في نفس الوقت من اليوم ، من الناحية المثالية خلال الدورة المظلمة للحيوان ، كما هو الحال خلال ساعات المساء.
ملاحظه: يجب توخي الحذر لتمييز الفئران في السكن. تتوفر طرق مختلفة لتمييز الفئران ، مثل لكمات الأذن وعلامات الأذن وعلامات الذيل.
< p class = "jove_title" >
2. اختبار بارنز ميز: البناء
- احصل على لوح خشبي دائري قطره 120 سم.
- قطع 20 ثقبا دائريا (قطرها 4.5 سم) حول محيط الدائرة. ضع كل ثقب على بعد 2.5 سم من حافة المتاهة و 13 سم بعيدا عن الثقوب المجاورة.
- قم بتنعيم الأسطح ورسمها باللون الأبيض اللامع (يوصى بلون مشرق).
- قم بتعيين جانب واحد من لوحة المتاهة لإدخال خطافات أكواب صغيرة على بعد 2-3 سم تقريبا من كل من الثقوب ال 20 وضع خطافين لكل ثقب (واحد على جانبي كل حفرة).
- استخدم الأقراص السوداء الضحلة (البلاستيكية) لتغطية الثقوب على جانب المتاهة بخطافات. استخدم الخطافات لتأمين الأربطة المطاطية السميكة من أجل تثبيت الأقراص في قاع المتاهة.
- قم بتركيب متاهة Barnes بإحكام على ارتفاع 120 سم فوق سطح الأرض وبعيدا عن الأشياء الطويلة الأخرى المماثلة مثل الطاولات أو الكراسي. يمكن استخدام صندوق أو كرسي لدعم منتصف المتاهة.
- ضع ملصقات بيضاء كبيرة بشكل واحد على كل جدار (مثلث ودائرة وصليب) كإشارات متاهة إضافية على 3 جوانب من المتاهة. احتفظ بالملصقات على الجدران حول المتاهة لكل تجربة.
- على الجانب الأخير من المتاهة ، قم بإعداد ستارة سوداء صلبة لإخفاء المراقبين بحيث يمكن تسجيل البيانات بدقة دون أن يكون الباحثون مرئيين للفئران في المتاهة.
- قم بتعليق كاميرا فيديو فوق الساحة مع رؤية شاملة لسطح المتاهة بأكمله.
- نظف كل سطح من المتاهة (الأقراص السوداء والصندوق المستهدف متضمنا) بالماء ثم محلول الإيثانول بنسبة 70٪ قبل وبعد كل تجربة للماوس.
- ضع مصدر ضوء بقوة 100 واط 25 سم فوق مركز المتاهة (قم بتشغيل/إيقاف التشغيل في بداية / نهاية التجربة) وتأكد من أن الأقراص والخطافات تواجه الأرض.
ملاحظه: يجب إطفاء جميع الأضواء العلوية الأخرى في الغرفة أثناء الاختبار. يوصى بإضافة صانع ضوضاء بالموجات فوق الصوتية معلق بجانب ضوء 100 واط. قم بتشغيله / إيقاف تشغيله في بداية / نهاية كل إصدار تجريبي.
< p class = "jove_title" >
3. اختبار بارنز ميز: الإجراء
ملاحظة: تأكد من تنظيف جميع مكونات المتاهة بالماء ومحلول الإيثانول بنسبة 70٪ قبل وبعد كل تجربة ، مما يتيح وقتا حتى يجف تماما قبل استئناف الاختبار. تأكد من تجهيز مستلزمات التنظيف بالإضافة إلى مؤقتات للتجارب.
- قم بإسكان جميع الفئران في مجموعات باستخدام طريقة تعريف موثوقة. احتفظ بالفئران خارج غرفة الاختبار عندما لا تعمل بنشاط على المتاهة. هذا لضمان عدم تعرضهم لصانع الضوضاء بالموجات فوق الصوتية قبل الأوان.
- تعامل مع الفئران عن طريق التقاطها برفق وإمساكها من قاعدة الذيل ، مع إبقاء الكفوف على يدك.
- للتدريب ، اجعل الفئران تعمل على المتاهة يوميا مرة واحدة يوميا لمدة 7 أيام متتالية لتقييم التعلم / الاستحواذ.
ملاحظه: يمكن إجراء تجربة واحدة طويلة الأمد في وقت لاحق لتقييم الذاكرة / الاحتفاظ. قام البروتوكول الحالي بتدريب الفئران المراهقة بدءا من اليوم 32 بعد الولادة وتم إجراء تجربة طويلة الأمد على البالغين في عمر 4 أشهر.
قم - بتعيين كل ماوس عشوائيا إلى ثقب مستهدف لاستخدامه طوال فترة الاختبار. يمكن تسمية الثقوب من 1 إلى 20 في الجزء السفلي من المتاهة أو على السطح الخارجي لمحيط المتاهة ، حيث لا تكون مرئية للفأر في المتاهة.
- استبدل قرص الثقب المخصص بصندوق أسود صغير (23 × 11 سم). قم بتثبيته بإحكام بمتاهة بارنز باستخدام أربطة مطاطية متصلة بأقرب الخطافات.
ملاحظه: المربع المستهدف ضحل بدرجة كافية بحيث يمكن للماوس النزول إليه بسهولة أو يحتوي على خطوة للتأكد من أن الماوس لا يضطر إلى القفز إليه.
- ضع الماوس في وسط المتاهة أسفل كوب للتأقلم لمدة 30 ثانية حتى يبدأ الاختبار. ابدأ تسجيل الفيديو.
- قم بتشغيل صانع الضوضاء الخفيف والموجات فوق الصوتية. ارفع الكوب عبر آلية خيط لتجنب تحيز الرأس الأولي للحيوان. ابدأ مؤقتا واجلس خلف الستارة للمراقبة.
- بعد دخول الماوس إلى الفتحة المستهدفة ، قم بتغطية الفتحة بنفس الكوب غير الشفاف المستخدم في بداية التجربة أو الموثق وقم بإيقاف تشغيل صانع الضوضاء بالموجات فوق الصوتية. إذا لم يدخل الماوس الهدف بعد انقضاء 5 دقائق ، فقم بوضع الماوس في الفتحة المستهدفة.
- تأكد من دخول الماوس إلى الفتحة. عندما يكون الماوس داخل الصندوق المستهدف ، قم بتغطية الفتحة وإيقاف تشغيل صانع الضوضاء. اسمح للماوس بالبقاء في المربع المستهدف لمدة 1 دقيقة دون إزعاج.
- على الرغم من أن الثقب المستهدف سيظل ثابتا لكل فأر طوال فترة التدريب ، قم بتشغيل الفئران بترتيب عشوائي كل يوم للتأكد من أنها لا تتبع أي إشارات / روائح تركها الماوس السابق.
