علاج بيلوكاربين الجهازي: نموذج الفأر لصرع الفص الصدغي

الملخص

المصدر: Kim ، J. E. and Cho ، K. O. نموذج بيلوكاربين لصرع الفص الصدغي ومراقبة مخطط كهربية الدماغ باستخدام نظام القياس الإشعاعي عن بعد في الفئران. J. Vis. Exp. (2018).

يعرض هذا الفيديو إجراء إحداث حالة الصرع (SE) في الفئران عن طريق الإعطاء الجهازي للبيلوكاربين لنمذجة صرع الفص الصدغي.

البروتوكول

تمت مراجعة جميع الإجراءات التي تنطوي على نماذج حيوانية من قبل لجنة رعاية المؤسسية المحلية ومجلس المراجعة البيطرية JoVE.

< p class = "jove_title" >1. SE الحث

1. قم بشراء فئران ذكور C57BL / 6NHsd البالغة من العمر 8 أسابيع ووزن كل فأر. بعد ذلك ، استخدم قلم تحديد لتمييز ذيول جميع الفئران لسهولة التعرف عليها أثناء تحريض SE.
2. احسب كمية سكوبولامين ميثيل بروميد (سكوبولامين ؛ 2 مجم / كغ) ، تيربوتالين هيميسولفات (تيربوتالين ؛ 2 مجم / كغ) ، وهيدروكلوريد بيلوكاربين (بيلوكاربين ؛ 280 مجم / كجم) بناء على وزن الفأر وأضف المحلول الملحي (0.9٪ كلوريد الصوديوم ، 10 مل / كجم) لعمل المحاليل.
   ملاحظة: على سبيل المثال ، إذا كان وزن الفأر 25 جم ، يتم تطبيق الكميات التالية: سكوبولامين وتيربوتالين: 2 مجم / كجم * (25 جم / 1,000 جم) = 0.05 مجم ، محلول ملحي: 10 مل / كجم * (25 جم / 1,000 جم) = 0.25 مل ، بيلوكاربين: 280 مجم / كجم * (25 جم / 1,000 جم) = 7 مجم ، محلول ملحي: 10 مل / كجم * (25 جم / 1,000 جم) = 0.25 مل.
3. قم بتحميل خليط السكوبولامين والتيربوتالين في حقنة 1 مل بإبرة 30 جم. حقن المحلول داخل الصفاق في كل فأر ، ثم أعد الفئران إلى أقفاصها. بعد 30 دقيقة من إعطاء سكوبولامين وتيربوتالين ، يتم حقن محلول بيلوكاربين في كل فأر (IP. ؛ حقنة 1 مل ؛ إبرة 30 جم). مباشرة بعد حقن البيلوكاربين ، ضع الفئران في حاضنة (28-30 درجة مئوية) للمراقبة.
4. راقب سلوك الفئران بعناية حتى يتم إحداث SE. إذا تم الكشف عن نوبات حركية حوفية تتوافق مع المرحلة 3 أو أعلى وفقا لمقياس راسين ، فقم بتسجيل الوقت ومراقبة الفئران لتحديد ما إذا كانت النوبات تحدث بشكل متكرر. بمجرد أن تستمر النوبات الحركية المستمرة لأكثر من دقيقتين ، ضع الفأر في قفص جديد في درجة حرارة الغرفة واستمر في المراقبة لمدة 3 ساعات لتحديد ما إذا كانت نوباتها المتشنجة مستمرة ويتم تحفيز SE. القتل الرحيم للفئران التي فشلت في دخول SE في حوالي ساعتين بعد حقن البيلوكاربين.
   ملاحظة: مقياس راسين. المرحلة 1 ، حركة الفم والوجه. المرحلة 2 ، إيماءة الرأس. المرحلة 3 ، كلونوس الطرف الأمامي. المرحلة 4 ، التربية مع كلونوس الأمامي. المرحلة 5 ، التربية والسقوط مع كلونوس الطرف الأمامي. إذا لم يتم نقل الماوس إلى القفص في درجة حرارة الغرفة مباشرة بعد تحريض SE ، يمكن أن يموت الماوس بسبب ارتفاع الحرارة.
5. إنهاء النوبات الحادة السلوكية بعد 3 ساعات من بداية SE عن طريق حقن محلول الديازيبام (i.p. ؛ 10 مجم / كجم ؛ حقنة 1 مل ؛ إبرة 30 جم). اصنع محلول الديازيبام عن طريق تخفيف 5 مجم / مل من الديازيبام في زيت الخروع المهدرج 10٪ بولي أوكسيل 35 عن طريق إضافة محلول ملحي (i.p. ؛ 10 مل / كجم ؛ حقنة 1 مل ؛ إبرة 30 جم).
   ملاحظة: 10٪ بولي أكسيل 35 محلول زيت الخروع المهدرج: 1 مل بولي أوكسيل 35 محلول زيت الخروع المهدرج + 9 مل محلول ملحي. قم بتخزين المحلول في درجة حرارة الغرفة. على سبيل المثال ، إذا كان وزن جسم الفأر 25 جم ، فقم بحقن 250 ميكرولتر من محلول الديازيبام: 50 ميكرولتر 5 مجم / مل ديازيبام + 200 ميكرولتر 10٪ بولي أكسيل 35 محلول زيت الخروع المهدرج = 250 ميكرولتر 1 مجم / مل ديازيبام.
6. بالنسبة للفئران الزائفة ، قم بإجراء حقن IP. لخليط بروميد ميثيل سكوبولامين وخليط هيميسولفات تيربوتالين (IP. ؛ كلاهما 2 مجم / كجم ، 10 مل / كجم ؛ حقنة 1 مل ؛ إبرة 30 جم). بعد 30 دقيقة ، قم بحقن المحلول الملحي داخل الصفاق (IPP ؛ 10 مل / كجم ؛ حقنة 1 مل ؛ إبرة 30 جم).
   ملاحظة: إذا كان وزن جسم الفأر 25 جراما ، فقم بحقن 250 ميكرولتر من المحلول الملحي بدلا من بيلوكاربين.
7. بعد حقن الديازيبام (i.p.؛ 1 مل حقنة؛ 30 جم إبرة)، قم بإعطاء 1 مل من سكر العنب 5٪ لكل فأر فردي (i.p.؛ حقنة 1 مل؛ إبرة 26 جم).
   ملاحظة: يوفر 1 مل من حقن سكر العنب بنسبة 5٪ مصدر طاقة وترطيب يمكن أن يزيد من معدل البقاء على قيد الحياة.
8. أثناء الرعاية اللاحقة في الحاضنة (28-30 درجة مئوية) ، امسح الإفرازات الزائدة مثل اللعاب والدموع والبراز.
9. في اليوم الأول بعد تحريض SE ، قم بوزن الفئران واحتفظ بها في الحاضنة (28-30 درجة مئوية) ليوم إضافي. في اليوم 2 ، بعد تحريض SE ، قم بوزن الفئران وإعادتها إلى قفص منزلها. توفير طعام رطب لتسهيل تعافيهم.
   ملاحظة: في هذه التجربة ، كان معدل وفيات C57BL / 6NHsd بعد إنهاء SE 8.57٪ في المتوسط (3 من أصل 35 فأرا تم اختبارها).
10. قم بقياس وزن الجسم اليومي للحيوانات حتى 7 أيام بعد البيلوكاربين وحقن الفئران بسكر العنب بنسبة 5٪ (حقنة 1 مل ؛ إبرة 26 جم) عندما لا يزيد وزن الجسم. توقف عن مراقبة وزن الجسم عندما تبدأ الفئران في استعادة وزن الجسم وتستهلك طعاما رطبا دون صعوبة في يومين بعد حقن بيلوكاربين.
    ملاحظة: إذا لم يزد وزن جسم الفأر حتى 7 أيام بعد SE ، فاستبعد الفأر من التجربة والقتل الرحيم بثاني أكسيد الكربون. اعتمادا على خلفية الفأر ، يمكن أن يحدث الموت في بعض الأحيان. ومع ذلك ، في حالة C57BL / 6NHsd ، مات أقل من 1٪ من الفئران في هذه التجارب. مع البقاء على قيد الحياة لأكثر من 7 أيام بعد تحريض SE ، نادرا ما تموت الفئران خلال الفترة الكامنة.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة الاسم الشركة رقم فهرسي التعليقات < تي دي >C57BL / 6 < تي دي >إنفيجو < تي دي >C57BL / 6NHsd < تي دي > < td > نترات ميثيل سكوبولامين سيغما S2250 اصنع مخزون 10X < td >ملح هيميسولفات تيربوتالين سيغما تي 2528 اصنع مخزون 10X < td > بيلوكاربين هيدروكلوريد سيغما ص 6503 < تي دي >ديازيبام سمجين زيت الخروع (Kolliphor EL) سيغما سي 5135 < td > بولي أكسيل 35 زيت الخروع المهدرج < تي دي > محلول ملحي شركة دايهان فارم < تي دي >5٪ سكر العنب شركة دايهان فارم < td >1 مل حقنة شركة سونغ شيم ميدال المحدودة 26 إبرة قياس شركة سونغ شيم ميدال المحدودة 26 جم * 13 مم (1/2 بوصة) < TD >30 إبرة قياس شركة سونغ شيم ميدال المحدودة 30 جم * 13 مم (1/2 بوصة)