تمت مراجعة جميع الإجراءات التي تنطوي على نماذج حيوانية من قبل لجنة رعاية المؤسسية المحلية ومجلس المراجعة البيطرية JoVE.
1. جراحة زرع عمود الرأس
ملاحظة: تأكد من استخدام الأدوات المعقمة وترتيب الجراحة والتعافي في مناطق مختلفة. بمجرد إتقانها ، تستغرق عملية الزرع حوالي 30 دقيقة.
- بالنسبة للتسكين ، قبل 30 دقيقة من بدء الجراحة ، قم بحقن البوبرينورفين تحت الجلد (0.05 مجم / كجم) وأعد إلى قفصه المنزلي.
ملاحظه: تستمر تأثيرات مسكن البوبرينورفين حوالي 12 ساعة ، بعد فترة طويلة من نهاية الإجراء. في تجربتنا ، لا تظهر الفئران أي علامات على الضيق تتعلق بهذا التدخل ولكن يوصى بجرعة لاحقة قدرها 0.05 مجم / كجم من البوبرينورفين بعد 24 ساعة من الجراحة.
- قم بتخدير في غرفة بغاز 2.5٪ -3٪. انتظر 3 دقائق وتحقق مما إذا كان الماوس مخدرا بشكل صحيح من خلال مراقبة التنفس وقلة الحركة داخل الغرفة. مرر الماوس إلى مخروط الأنف على طاولة جراحية باستخدام وسادة تدفئة ، وعن طريق القرص بين الأصابع ، تحقق من عدم وجود منعكس انسحابي وخفض الأيزوفلوران إلى 1.5٪.
- احلق رأس الماوس باستخدام ماكينة حلاقة كهربائية. للحصول على بيئة معقمة ، افركي المنطقة المحلوقة بمحلول اليود وبعد ذلك بالكحول بنسبة 70٪. كرر هذا الإجراء مرتين أخريين.
- حقن هيدروكلوريد الليدوكائين (2٪ ، 2 مجم / كجم) تحت جلد الرأس للتخدير الموضعي وانتظر 5 دقائق حتى تبدأ التأثيرات. لتجنب تلف العين بسبب الجفاف ، قم بتغطية عيني الفأر بمرهم بيطري موضعي للعيون.
- باستخدام زوج من الملقط الحاد ، أمسك الجلد في مؤخرة الرأس ، وباستخدام مقص غير حاد (أو مشرط) ، قم بعمل شق طولي يبلغ حوالي 1.5 سم لفضح الجمجمة.
- بمساعدة مشرط ، خدش السمحاق. احرص على عدم الخدش بشدة ، حيث يمكن أن يتعرض تثبيت عمود الرأس للخطر إذا بدأت الجمجمة في النزيف قليلا.
- ضع قطرة من المنشط الأخضر (انظر جدول المواد) على منتصف الجمجمة. سيؤدي ذلك إلى تحسين تثبيت الأسمنت عن طريق زيادة نفاذية العظام.
- تحضير الأسمنت: اخلطي ملعقة واحدة (انظر جدول المواد) من البوليمر مع خمس قطرات من المونومر وقطرة واحدة من المحفز. بمساعدة فرشاة ، ضع كمية وفيرة من مزيج الأسمنت بين معالم جمجمة لامدا وبريجما.
- ضع عمود الرأس بسرعة على الأسمنت بحركة تمرير من لامدا إلى بريجما. بعد وضع عمود الرأس ، أعد وضع المزيد من الأسمنت حول الجزء السفلي للتأكد من أن عمود الرأس يلتصق بشكل صحيح بالجمجمة. لضمان التثبيت المناسب ، تأكد من تطبيق الأسمنت بكثرة وأنه يجف قبل المتابعة إلى الخطوة التالية.
ملاحظه: مع إجراء التثبيت هذا ، لن ينفجر عمود الرأس ويسمح بإجراء اختبارات متكررة طويلة الأمد ؛ في أيدينا ، إزالة عمود الرأس <10٪.
- قم بإعداد مزيج الراتنج عن طريق تطبيق نسبة مسحوق إلى سائل تتيح تناسقا سلسا للخليط. ضع الراتنج حيث تم وضع الأسمنت وكذلك حول عمود الرأس لحماية سطحه.
- انتظر 3 دقائق حتى يجف الراتنج وأغلق الجلد في الجزء الخلفي من الأذنين بخياطة أحادية الشعيرات. باستخدام قطعة قطن ، ضع محلول اليود المخفف (10٪ -20٪) على المنطقة التي يتم تشغيلها.
ملاحظه: تأكد من عدم تعلق الجلد بالراتنج.
- أطفئ التخدير وضع تحت ضوء أحمر دافئ لتجنب انخفاض حرارة الجسم. ضع الطعام المبلل والهيدروجيل أو أي مصدر مياه آخر في الجل في أرضية القفص. لا تترك الفأر دون رقابة حتى يستعيد وعيه. بمجرد أن يتعافى تماما من الإجراء (عادة ، بعد 30 دقيقة إلى 1 ساعة) ، ضعه في قفص به مجموعات من ثلاثة أو أربعة لتحفيز التفاعلات الاجتماعية.