عزل الميتوكوندريا: تقنية لعزل الميتوكوندريا من عينة أنسجة سرطان المبيض البشري

الملخص

المصدر: Zhan ، X. et al. تحضير الميتوكوندريا من أنسجة سرطان المبيض وأنسجة المبيض المراقبة لتحليل البروتينات الكمي. J. Vis. Exp. (2019)

يصف هذا الفيديو إجراء عزل الميتوكوندريا من أنسجة سرطان المبيض البشري باستخدام الطرد المركزي التفاضلي السرعة بالاشتراك مع الطرد المركزي المتدرج الكثافة. يمكن استخدام الميتوكوندريا المعزولة للتحليل البروتيني لسرطان المبيض البشري بروتين الميتوكوندريا.

البروتوكول

تم تنفيذ جميع الإجراءات التي تشمل مشاركين بشريين وفقا للمبادئ التوجيهية المؤسسية والوطنية والدولية لرفاهية الإنسان وتمت مراجعتها من قبل مجلس المراجعة المؤسسية المحلي.

< p class = "jove_title" >1. تحضير الميتوكوندريا من أنسجة سرطان المبيض البشري

< p class = "jove_content" > تم استخدام عينات أنسجة المبيض بما في ذلك أنسجة سرطان المبيض (ن = 7) لهذا البروتوكول.

1. تحضير 250 مل من المخزن المؤقت لعزل الميتوكوندريا عن طريق خلط 210 ملي مولار مانيتول ، 70 ملي سكروز ، 100 ملي كلوريد البوتاسيوم (KCl) ، 50 ملي تريس حمض هيدروكلوريك ، 1 ملي مولار حمض رباعي الأسيتيك ديامين (EDTA) ، 0.1 ملي مولار إيثيلين جلايكول مكرر (2-أمينوإيثيل إيثر) حمض رباعي ال....

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة الاسم الشركة رقم فهرسي التعليقات حمض رباعي الأسيتيك ديامين (EDTA) سيغما 798681-100 جرام لا مائي، يتدفق بحرية، Redi-Dri، ≥98٪ DTT سيغما 10197777001 1،4-ديثيوثريتو إيثيلين جلايكول مكرر (2-أمينوإيثيل إيثر) حمض رباعي الأسيتيك (EGTA) سيغما E0396-10G بيوإكسترا ، ≥97.0٪ الخالط صامتة شيك HYQ-3110 جهاز طرد مركزي فائق السرعة بدرجة حرارة منخفضة إيبندورف 5424 ص الطرد المركزي شيانغ يي TDZ4 - WS مانيتول ماكلين M813424-100 جرام المانيتول هو بوليول (كحول متعدد الهيدراتيك) ينتج من الهدرجة من الفركتوز الذي يعمل كعامل تحلية ومرطب ويستكثر. لديها رطوبة منخفضة وضعف الملاءة النفطية. مثبط البروتياز فينيل ميثان سولفونيل فلوريد (PMSF) سولاربيو P0100-1 مل PMSF هو مثبط للبروتياز يتفاعل مع بقايا السيرين لتثبيط التربسين والكيموتريبسين والثرومبين والغراء. كلوريد البوتاسيوم ماكلين P816354-25 جرام كلوريد البوتاسيوم ، KCI ، المعروف أيضا باسم موريات البوتاسيوم والسيلفيت ، هو مادة صلبة بلورية عديمة اللون ذات طعم مالح يذوب عند 776 درجة مئوية (1420 درجة فهرنهايت). إنه قابل للذوبان في الماء ، ولكنه غير قابل للذوبان في الكحول. يستخدم كلوريد البوتاسيوم في الأسمدة والمستحضرات الصيدلانية والتصوير الفوتوغرافي وكبديل للملح