مقالة منهجية

الحقن داخل الصفاق للخلايا: طريقة لتوصيل الخلايا السرطانية إلى الأنسجة الدهنية البريتونية لنموذج الفئران

أبريل 30, 2023

في هذه المقالة

الملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

المصدر: Krishnan، V. et al. مناهج لدراسة الاستعمار النقيلي لسرطان المبيض لهياكل البقع اللبنية في الدهون الصفاقية. J. Vis. Exp. (2015)

في هذا الفيديو ، نقوم بإجراء حقن داخل الصفاق لتعليق الخلايا السرطانية المبيضية في نموذج فأر لدراسة استعمار خلايا سرطان المبيض في الأنسجة الدهنية البريتونية ورم خبيث لاحق.

البروتوكول

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

تمت مراجعة جميع الإجراءات المتعلقة بالحيوانات من قبل اللجنة المؤسسية المحلية لرعاية ومجلس المراجعة البيطرية JoVE.

فئة

1. الحقن داخل الصفاق للخلايا

ملاحظة: في تجاربنا ، يتم التعامل مع الفئران في خزانة تدفق هواء رقائقي أو خزانة للسلامة البيولوجية داخل منشأة الحاجز الخاصة بنا من أجل الحد من خطر التعرض لمسببات الأمراض. من أجل إثبات هذه التقنية بوضوح ، تم إجراء الإجراءات الواردة في الفيديو المصاحب في مختبر معتمد للعمل على. لا تتطلب هذه التقنية بالذات أن تكون تحت التخدير. بموجب البروتوكولات المعتمدة ، قم بإجراء هذه التقنية على الحية. استخدم سلالات مناسبة من الفئران لهذه الدراسة. على سبيل المثال: استخدام الفئران العارية الرياضية التي تعاني من نقص المناعة لدراسة استعمار خلايا سرطان المبيض البشرية (SKOV3ip.1 و HeyA8). استخدم الفئران C57BL / 6 ذات الكفاءة المناعية لدراسة استعمار خلايا سرطان المبيض في الفئران (ID8).

  1. قم بتحميل 500 ميكرولتر من معلق الخلية المفردة لخلايا سرطان المبيض في حقنة وضعها في إبرة معقمة 25 جرام. هذا يقلل من قص الخلايا قبل الحقن.
  2. التقط الماوس من قفص الرقبة وامسك الذيل باستخدام راحة اليد والسبابة وثبت الساق الخلفية اليسرى بين الخاتم والإصبع الصغير (عندما يكون الماوس مقيدا باليد اليسرى).
    ملاحظة: لتجنب صدمة أعضاء البطن ، كبح جماح الفأر جيدا حتى لا يتحرك أثناء الحقن.
  3. تخيل خطا عبر البطن فوق الركبتين مباشرة ، وحدد نقطة على الجانب الأيمن للحيوان وبالقرب من خط الوسط. نقطة الدخول هي قحفية ووسطية قليلا من الحلمة الأخيرة.
    ملاحظه: يؤدي إدخال الإبرة على الجانب الأيمن للفأر إلى تجنب الأعور وتقليل خطر ثقب الأمعاء.
  4. أدخل الإبرة في المنطقة الجانبية السفلية من بطن الفئران على عمق 0.5 سم تقريبا. اسحب المكبس للخلف للتأكد من أن الإبرة لم تخترق الأوعية الدموية أو الأعضاء البريتونية الأخرى.
    1. في حالة استنشاق أي سائل ، تخلص من المحقنة (والعينة). يشير الشفط البني المخضر أو الأصفر إلى تغلغل الإبرة في الأمعاء أو المثانة ، على التوالي.
  5. حقن العينة باستخدام ضغط بطيء وثابت. اسحب الإبرة وأعد الماوس إلى قفصه. لا تقم بتجميع المحقنة قبل التخلص منها في وعاء حاد.
  6. التضحية بالفئران عن طريق اختناق ثاني أكسيد الكربون2 وإزالة الأعضاء الحيوية في نقطة زمنية محددة بعد الحقن.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
لم يتم الإعلان عن أي تضارب في المصالح.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة الاسم الشركة رقم فهرسي التعليقات DMEM كورنينج 10-013-السيرة الذاتية برنامج تلفزيوني كورنينج 21-040-السيرة الذاتية بدون كالسيوم ومغنيسيوم 26 إبرة قياس دينار بحريني 329652

إعادة الطباعة والأذونات

طلب إذن لإعادة استخدام النص أو الأشكال في مقالة JoVE هذه

طلب إذن

الوسوم

مقالات ذات صلة