مقالة منهجية

الحصول على خلايا سرطان المبيض الأولية من العينات الصلبة: طريقة لزراعة خلايا سرطان المبيض الظهارية من عينات ورم المبيض

أبريل 30, 2023

في هذه المقالة

الملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

المصدر: Pribyl، L. J. et al. طريقة للحصول على خلايا سرطان المبيض الأولية من العينات الصلبة. J. Vis. Exp. (2014)

في هذا الفيديو ، نصف طريقة لعزل وتوصيف خلايا سرطان المبيض الأولية من عينات أنسجة ورم المبيض الصلبة. تعتبر الخلايا السرطانية الظهارية التي تم الحصول عليها باستخدام هذا البروتوكول مناسبة لفهم العمليات التي قد تؤدي إلى بدء سرطان المبيض وتطوره.

البروتوكول

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

تم تنفيذ جميع الإجراءات التي تشمل مشاركين بشريين وفقا للمبادئ التوجيهية المؤسسية والوطنية والدولية لرفاهية الإنسان وتمت مراجعتها من قبل مجلس المراجعة المؤسسية المحلي.

فئة

1. معالجة الأنسجة

  1. من خلال العمل في ظروف معقمة ، انقل العينات إلى طبق بتري (60 مم × 60 مم) يحتوي على 10 مل من PBS الطازج المثلج وباستخدام شفرة حلاقة معقمة ، مقطعة إلى أصغر القطع الممكنة (2 مم أو أقل) (الشكلان 1 أ و 1 ب).
  2. انقل الأنسجة المفرومة إلى أنبوب مخروطي سعة 15 مل يحتوي على 10 مل من التسخين المسبق (37 درجة مئوية لمدة 30 دقيقة) ديسبيز II (2.4 وحدة / مل) في DMEM واحتضانه عند 5٪ ثاني أكسيد الكربون2 و 37 درجة مئوية لمدة 30 دقيقة. لضمان الهضم الأمثل للعينات ، قم بتقليب ملاط الخلية يدويا كل 5 دقائق.
  3. بعد 30 دقيقة من الحضانة ، انقل ملاط الخلية (باستخدام ماصة مصلية سعة 10 مل) إلى مصفاة خلوية (شبكة 70 ميكرومتر) موضوعة فوق أنبوب مخروطي سعة 50 مل وقم بالضغط برفق على الشبكة باستخدام مكبس حقنة. تخلص من أي أنسجة غير منفصلة (متبقية في الجزء العلوي من الشبكة) واجمع معلق الخلية الذي تم الحصول عليه في الأنبوب المخروطي المعقم سعة 50 مل. جهاز طرد مركزي عند 320 × جم لمدة 7 دقائق عند 4 درجات مئوية (الشكل 2).
  4. تخلص من المادة الطافية حبيبات الخلية في 10 مل من DMEM التي تحتوي على 10٪ FBS.
  5. احتضان معلق الخلية في طبق بتري عند 5٪ ثاني أكسيد الكربون2 و 37 درجة مئوية (الشكل 3).
  6. قم بتغيير الوسط بعد 24 ساعة من الطلاء الأولي. هذا يسمح بإزالة الحطام الخلوي وغالبية كريات الدم الحمراء الموجودة في المزرعة.
  7. قم بتغيير الوسيط كل ثلاثة أيام للأسبوعين التاليين ، وبعد ذلك تكون ثقافات EOC الأولية جاهزة للتطبيقات النهائية.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

figure-results-1
الشكل 1. معالجة العينات السريرية. أ) عينة صلبة منقولة إلى طبق بتري يحتوي على 10 مل من 1x PBS الطازج المثلج. ب) العينات السريرية مقطعة إلى قطع بحجم 2 مم

< p class = "jove_content" fo: keep-together.within-page = "1" >figure-results-2
الشكل 2. فصل خلايا EOC عن الأنسجة غير المنفصلة. بعد الهض...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

لم يتم الإعلان عن أي تضارب في المصالح.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة الاسم الشركة رقم فهرسي التعليقات 1x PBS ، معقم إنفيتروجين 14190-144 غطاء لولبي ، عينة من مادة البولي بروبيلين
حاوية معقمة الترمو: العلمية DMEM متوسط، معقم إنفيتروجين 11995-065 مصل الأبقار الجنيني ، معقم هيكلون حراري علمي SH30396.03 100x بنسلين ستربتومايسين ، سائل إنفيتروجين 15140-122 Dispase II ، معقم روش 04942 078 001 ملقط صغير رفيع الأطراف ومشرط
شفرة معقمة فيشر ساينتيك ملقط: 08-953E ، الشفرات:
08-927-5 د مقص تشريح صغير معقم فيشر ساينتيك 08-945 15 مل أنابيب مخروطية الشكل معقمة بي دي فالكون 352097 50 مل أنابيب مخروطية مغطاة ، معقمة بي دي فالكون 352027 10 مل ماصة مصلية معقمة كورنينج 13-678-11ه 6 مل مكبس حقنة معقمة تايكو للرعاية الصحية 8881516911 مرشح النايلون (70 ميكرومتر) مصفاة خلية ،
عقيم بي دي فالكون هاتف: 352350 طبق بتري 5 سم ، معقم كورنينج 430166 طبق بتري 10 سم معقم كورنينج 430167

إعادة الطباعة والأذونات

طلب إذن لإعادة استخدام النص أو الأشكال في مقالة JoVE هذه

طلب إذن

الوسوم

Dispase II PBS FBS

مقالات ذات صلة