اختبار Agarose Spin Down: تقنية لتضمين العضيات للتحليل النسيجي

الملخص

المصدر: Lee، S. et al. إنشاء وتحليل العضيات ثلاثية الأبعاد (3D) المشتقة من عينات النقائل العظمية لسرطان البروستاتا للمريض وطعومها الغريبة. J. Vis. Exp. (2020)

في هذا الفيديو ، نقوم بإجراء اختبار دوراني لتضمين عضيات سرطان البروستاتا ثلاثية الأبعاد في agarose. يمكن استخدام هذه العضيات المدمجة لمزيد من التحليل النسيجي المرضي لدراسة نمو السرطان وتطوره.

البروتوكول

< p class = "jove_title" >1. المعالجة العضوية لعلم الأنسجة: طريقة Agarose Spin Down

ملاحظة: تم اقتباس هذا البروتوكول من منشور سابق بواسطة Vlachogiannis et al. لقد أضفنا خطوة تتضمن تضمين الاغاروز لتضمين جميع مجموعات العضيات بنجاح.

1. قم بإزالة الوسائط الموجودة من البئر. احرص على عدم شفط قباب الغشاء القاعدي.
2. أضف حجما متساويا (يساوي حجم الوسائط التي تمت إزالتها من الخطوة 1) لمحلول استعادة الخلية واحتضنه لمدة 60 دقيقة عند 4 درجات مئوية.
قم
3. بإزاحة قبة الغشاء القاعدي باستخدام ماصة وسحق قبة الغشاء القاعدي باستخدام طرف ماصة. اجمع القبة المنفصلة ومحلول استعادة الخلايا في أنبوب سعة 1.5 مل.

النتائج

الشكل 1: خطوة أساسية لتضمين الاغاروز الناجح. عملية لفصل حبيبات الخلية عن جدار أنبوب 1.5 مل.

....

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة الاسم الشركة رقم فهرسي التعليقات 1 مل بيبيتمان جيلسون F123602 1 مل حقنة حقنة BD 329654 أنبوب 1.5 مل منتجات مختبر الطيف 941-11326-ATP083 إبرة 25 جرام إبرة BD PrecisionGlide 305122 4٪ بارافورمالدهايد (PFA) ألفا إيسار J61899 70٪ إيثانول (EtOH) VWR BDH1164-4 لب أغاروز لونزا 50000 لوحة زراعة الخلية - 24 بئر كوستار 3524 لوحة ثقافة الخلية - 48 بئر كوستار 3548 لوحة ثقافة الخلية - 6 بئر كوستار 3516 حل تفكك الخلايا ، Accumax شركة Innovative Cell Technologies، Inc. AM105 حل استعادة الخلايا كورنينج 354253 مكشطة الخلية سارستيدت 83.18 دولار موصل البيانات التفاعلية كورنينج / سيلجرو 21-031-السيرة الذاتية أطراف الماصة 1 مل (أطراف زرقاء) فيشربراند ريدي تيب 21-197-85 جهاز طرد مركزي صغير أعلى الطاولة ثيرموفيشر العلمي 75002426 كمبوند OCT الأنسجة تيك 4583 حمام مائي فيشر إس سي 2320