استخراج البروستاتا من الجهاز البولي التناسلي للفأر: تقنية لفصل غدة البروستاتا عن أعضاء الجهاز البولي والأعضاء التناسلية الأخرى في الفأر الذكر

تمت مراجعة جميع الإجراءات المتعلقة بالحيوانات من قبل اللجنة المؤسسية المحلية لرعاية ومجلس المراجعة البيطرية JoVE.

ملاحظة: يتم عرض التخطيطي في الشكل 1.

1. قتل فأر ذكر C57BL / 6 يبلغ من العمر 3 أشهر باستخدام طريقة القتل الرحيم الاستنشاقي_CO2 أو تقنية أخرى معتمد><ة. ملاحظه: يمكن استخدام الفئران التي تتراوح أعمارها بين 3 و 12 شهرا بنجاح في التجربة. من المرجح أن يكون لدى الفئران الأكبر سنا (> 6 أشهر) المزيد من الدهون حول UGS ، والتي ستحتاج إلى إزالتها. غالبا ما يكون تحديد الفصوص وفصلها أمرا صعبا في الفئران التي يقل عمرها عن 3 أشهر. يمكن استخدام سلالات أخرى للتجربة أيضا.
2. ضع الماوس على ظهره وقم بتأمين الساقين باستخدام المسامير بحيث ينكشف الجانب البطني للحيوان.
3. رش 70٪ من الإيثانول على بطن الماوس وامسحه نظيفا.
   ملاحظه: حلق شعر البطن قبل التشريح غير مطلوب.
4. ارفع الجلد من البطن ، جنبا إلى جنب مع طبقة العضلات ، باستخدام زوج من الملقط الحاد المتوسط وقم بعمل شق مقلوب على شكل حرف Y على البطن باستخدام المقص.
   1. أولا ، قم بعمل شق مستقيم باستخدام مقص حاد من أعلى القضيب مباشرة إلى القص (الشكل 2 أ).
   2. قطع من قاعدة الشق باتجاه كل إصبع ، حتى الفخذين (الشكل 2 ب). قم بطي الجلد للخلف على كلا الجانبين وفي الأسفل لعرض منطقة البطن بأكملها (الشكل 2c-e).
      ملاحظه: يختلف حجم القطع حسب عمر الماوس وحجمه. قد يتراوح حجم الشق المستقيم الأولي من 1.5 إلى 4 سم ، اعتمادا على حجم الماوس.
5. تحرك فوق الأعضاء الأخرى لفضح UGS. ارفع وحرك الأمعاء ذات اللون البني والأصفر (الشكل 2 و). التقط ضمادات دهن البطن (الأنسجة الإسفنجية البيضاء غير الشفافة) بالملقط وانقلها إلى الجانبين (الشكل 2 ز).
   ملاحظه: يتكون UGS من الحويصلات المنوية ، ومجرى البول ، والبروستاتا ، والقناة (الأسهر ، والأوعية الدموية) ، والمثانة البولية. يمكن التعرف عليه من خلال الزوج المميز من الأقواس نصف الدائرية البيضاء غير الشفافة (وهي الحويصلات المنوية) ، مع كيس المثانة المملوء بالسوائل المتصل بالقاعدة. النسيج الشفاف الموجود أسفل الحويصلات المنوية مباشرة هو البروستاتا.
6. حدد موقع UGS ، وأمسك المثانة البولية بإحكام باستخدام ملقط حاد ، وارفع UGS بالكامل لأعلى من بطن الفأر.
   ملاحظه: إذا كانت المثانة ممتلئة ، فقم بتصريفها أولا باستخدام حقنة صغيرة لتوفير قبضة أفضل بالملقط وتقليل خطر تمزق المثانة.
7. استمر في سحب المثانة ، وحرك مقصا أسفل المثانة والبروستاتا وصولا إلى العمود الفقري ، وقم بعمل قطع. قطع أي وصلات متبقية لتجويف البطن (الشكل 2h و 2i). احرص على عدم القطع بالقرب من UGS لتجنب القطع العرضي لأي نسيج من أنسجة البروستاتا.
   ملاحظه: أثناء إجراء القطع أسفل UGS ، يجب إدخال المقص على طول الطريق إلى الجزء الخلفي من الماوس ، بحيث يلتقط القطع العمود الفقري أيضا. تؤدي هذه الطريقة إلى قطع جميع الوصلات تقريبا بين UGS وتجويف البطن في قصاصة واحدة ، مما يقلل من الوقت اللازم لاستخراج الأنسجة من الفأر.
8. قم بإزالة UGS وضعه في 2-6 مل (يكفي لتغطية الأنسجة) من محلول ملحي مخزن بالفوسفات (PBS) أو وسط النسر المعدل من Dulbecco (DMEM ، نسبة عالية من الجلوكوز) في طبق بتري 6 سم (الشكل 2j و 2k) وانقله إلى مجهر تشريح (تكبير 10X).
   ملاحظه: قم بتغيير وسائط التشريح كما هو مطلوب في الخطوات المتبقية.

الشكل 1: مخطط انسيابي تخطيطي يوضح تشريح الجهاز البولي التناسلي للفأر وعزل البروستاتا. مخطط انسيابي لخطوات البروتوكول الموضحة في الأقسام 1

الشكل 2: تشريح UGS للفأر. صور خطوة بخطوة من تشريح UGS من فأر يبلغ من العمر 3 أشهر: (أ و ب) عمل الشقوق ، (ج) سحب الجلد للخلف لكشف منطقة البطن ، (و) تحريك الأمعاء ، (ز) تحريك وسادات دهون البطن ، (ح و أنا) استخراج UGS من تجويف البطن ، (ي) UGS المستخرج ، (ك) UGS المستخرج مع الأعضاء والأنسجة المختلفة المشار إليها على النحو التالي: SV (أصفر) = الحويصلات المنوية؛ P (أحمر) = البروستاتا. F (أرجواني) = دهون. V (أزرق فاتح) = أسهر ديفيرينس. و B (أخضر) = المثانة.