$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
تمت مراجعة جميع الإجراءات المتعلقة بالحيوانات من قبل اللجنة المؤسسية المحلية لرعاية ومجلس المراجعة البيطرية JoVE.
< p class = "jove_title" >
1. تشريح الجهاز البولي التناسلي (UGS)
ملاحظة: يتم عرض التخطيطي في الشكل 1.
- قتل فأر ذكر C57BL / 6 يبلغ من العمر 3 أشهر باستخدام طريقة القتل الرحيم الاستنشاقيCO2 أو تقنية أخرى معتمد><ة.
ملاحظه: يمكن استخدام الفئران التي تتراوح أعمارها بين 3 و 12 شهرا بنجاح في التجربة. من المرجح أن يكون لدى الفئران الأكبر سنا (> 6 أشهر) المزيد من الدهون حول UGS ، والتي ستحتاج إلى إزالتها. غالبا ما يكون تحديد الفصوص وفصلها أمرا صعبا في الفئران التي يقل عمرها عن 3 أشهر. يمكن استخدام سلالات أخرى للتجربة أيضا.
- ضع الماوس على ظهره وقم بتأمين الساقين باستخدام المسامير بحيث ينكشف الجانب البطني للحيوان.
- رش 70٪ من الإيثانول على بطن الماوس وامسحه نظيفا.
ملاحظه: حلق شعر البطن قبل التشريح غير مطلوب.
- ارفع الجلد من البطن ، جنبا إلى جنب مع طبقة العضلات ، باستخدام زوج من الملقط الحاد المتوسط وقم بعمل شق مقلوب على شكل حرف Y على البطن باستخدام المقص.
- أولا ، قم بعمل شق مستقيم باستخدام مقص حاد من أعلى القضيب مباشرة إلى القص (الشكل 2 أ).
- قطع من قاعدة الشق باتجاه كل إصبع ، حتى الفخذين (الشكل 2 ب). قم بطي الجلد للخلف على كلا الجانبين وفي الأسفل لعرض منطقة البطن بأكملها (الشكل 2c-e).
ملاحظه: يختلف حجم القطع حسب عمر الماوس وحجمه. قد يتراوح حجم الشق المستقيم الأولي من 1.5 إلى 4 سم ، اعتمادا على حجم الماوس.
- تحرك فوق الأعضاء الأخرى لفضح UGS. ارفع وحرك الأمعاء ذات اللون البني والأصفر (الشكل 2 و). التقط ضمادات دهن البطن (الأنسجة الإسفنجية البيضاء غير الشفافة) بالملقط وانقلها إلى الجانبين (الشكل 2 ز).
ملاحظه: يتكون UGS من الحويصلات المنوية ، ومجرى البول ، والبروستاتا ، والقناة (الأسهر ، والأوعية الدموية) ، والمثانة البولية. يمكن التعرف عليه من خلال الزوج المميز من الأقواس نصف الدائرية البيضاء غير الشفافة (وهي الحويصلات المنوية) ، مع كيس المثانة المملوء بالسوائل المتصل بالقاعدة. النسيج الشفاف الموجود أسفل الحويصلات المنوية مباشرة هو البروستاتا.
- حدد موقع UGS ، وأمسك المثانة البولية بإحكام باستخدام ملقط حاد ، وارفع UGS بالكامل لأعلى من بطن الفأر.
ملاحظه: إذا كانت المثانة ممتلئة ، فقم بتصريفها أولا باستخدام حقنة صغيرة لتوفير قبضة أفضل بالملقط وتقليل خطر تمزق المثانة.
- استمر في سحب المثانة ، وحرك مقصا أسفل المثانة والبروستاتا وصولا إلى العمود الفقري ، وقم بعمل قطع. قطع أي وصلات متبقية لتجويف البطن (الشكل 2h و 2i). احرص على عدم القطع بالقرب من UGS لتجنب القطع العرضي لأي نسيج من أنسجة البروستاتا.
ملاحظه: أثناء إجراء القطع أسفل UGS ، يجب إدخال المقص على طول الطريق إلى الجزء الخلفي من الماوس ، بحيث يلتقط القطع العمود الفقري أيضا. تؤدي هذه الطريقة إلى قطع جميع الوصلات تقريبا بين UGS وتجويف البطن في قصاصة واحدة ، مما يقلل من الوقت اللازم لاستخراج الأنسجة من الفأر.
- قم بإزالة UGS وضعه في 2-6 مل (يكفي لتغطية الأنسجة) من محلول ملحي مخزن بالفوسفات (PBS) أو وسط النسر المعدل من Dulbecco (DMEM ، نسبة عالية من الجلوكوز) في طبق بتري 6 سم (الشكل 2j و 2k) وانقله إلى مجهر تشريح (تكبير 10X).
ملاحظه: قم بتغيير وسائط التشريح كما هو مطلوب في الخطوات المتبقية.
