Method Article

أخذ عينات أحادية الخلية باستخدام المعالجة الدقيقة: تقنية لعزل الخلايا المفردة من تعليق الخلايا السرطانية

April 30th, 2023

In This Article

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

المصدر: Chen S. et al. التخصيب المسبق للخلية المستهدفة وتضخيم الجينوم الكامل لتوصيف خلية واحدة في اتجاه مجرى النهر. J. Vis. Exp. (2018)

يصف هذا الفيديو تقنية عزل الخلايا المفردة من مجموعة من الخلايا المستهدفة لإجراء تحليل المصب. في هذه الطريقة ، يتم استخدام معالج دقيق مثبت على المجهر لعزل عالي الدقة لخلية مستهدفة واحدة.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
< p class = "jove_title" >1. أخذ العينات أحادية الخلية

  1. التلاعب الدقيق
    ملاحظة: للسماح بتطبيقات المصب مثل تحليل الجينوم الكامل (WGA) ، ستتم إضافة خلايا مفردة معزولة إلى 2 ميكرولتر من المزيج الرئيسي لتحلل الخلية. قم بإعداد مزيج رئيسي وفقا لعدد الخلايا المراد معالجتها. احسب الأحجام الإضافية للخسارة بسبب سحب العينات وضع المزيج الرئيسي لتحلل الخلايا على الجليد.
    1. تحضير المزيج الرئيسي لتحلل الخلايا (مكونات مجموعة WGA ، جدول المواد والكواشف). باختصار ، امزج 2.0 ميكرولتر من محلول التفاعل ، و 1.3 ميكرولتر من أوكتيل فينوكسي بولي إيثوكسي إيثانول (محلول 10٪) ، و 1.3 ميكرولتر من 4- (1،1،3،3-رباعي ميثيل بوتي....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
لم يتم الإعلان عن أي تضارب في المصالح.

Materials

List of materials used in this article Name Company Catalog Number Comments محلول ملحي مخزن بالفوسفات (1x PBS) ثيرمو فيشر العلمي 10010-015 أنابيب الفراغ EDTA (أو Na-heparin) دينار بحريني 366450 (أو 366480) يستخدم كأنبوب تفاعل لالتقاط الخلايا المستهدفة خارج الجسم الحي ماصات باستور 150 مم فولاك D810 تستخدم للتطبيق المنخفض الحجم للخلايا على C & R قلم الشحوم داكو S2002 تستخدم على الشرائح الزجاجية لتثبيت تعليق الخلية في مكانه Axiovert M200 مجهزة ب Mikromanipulator MMJ و CellTram vario زايس / إيبندورف استخدم المعالجة الدقيقة في متناول اليد الشعيرات الدموية الدقيقة (قطرها 25 ميكرومتر) ، CustomTip من النوع الأول إيبندورف 930001201 تستخدم للتلاعب الدقيق بالخلايا 0.2 مل أنابيب PCR بوزيم 710920

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Single Cell SamplingMicromanipulation TechniqueCancer Cell SuspensionSingle Cell IsolationMicrocapillary TipGlass Slide PreparationDownstream AnalysisCell LysisLive Cell IsolationMicromanipulator Microscope

Related Articles