Method Article

أخذ عينات الخلية المفردة باستخدام التشريح الدقيق بالليزر: تقنية لحصاد الخلايا المستهدفة من مجموعة خلايا غير متجانسة

April 30th, 2023

In This Article

Abstract

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

المصدر: Chen S. et al. التخصيب المسبق للخلية المستهدفة وتضخيم الجينوم الكامل لتوصيف خلية واحدة في اتجاه مجرى النهر. J. Vis. Exp. (2018)

يصف هذا الفيديو تقنية الحصول على خلية واحدة من مجموعة خلايا غير متجانسة باستخدام التشريح الدقيق لالتقاط الليزر. يمكن استخدام الخلية المفردة المعزولة لمزيد من الدراسات الجينومية أو أبحاث السرطان.

Protocol

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
< p class = "jove_title" >1. أخذ العينات أحادية الخلية

  1. التشريح المجهري بالليزر
    ملاحظة: ستتم إضافة خلايا مفردة إلى 4.5 ميكرولتر من المزيج الرئيسي لتحلل الخلايا (مكونات مجموعة WGA وجدول المواد والكواشف) ل WGA.
    1. تحضير المزيج الرئيسي لتحلل الخلية وفقا ل Czyż et al. عن طريق خلط 5.0 ميكرولتر من محلول التفاعل ، 1.3 ميكرولتر من أوكتيل فينوكسي بولي إيثوكسي إيثانول (محلول 10٪) ، 1.3 ميكرولتر من 4- (1،1،3،3-tetramethylbutyl) فينيل بولي إيثيلين جلايكول (محلول 10٪) ، resp. ، 2.6 ميكرولتر من محلول البروتيناز K و 34.8 ميكرولتر من الماء الخالي من RNase / DNase للحصول على مزيج رئيسي ل 10 عينات (الحجم....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
لم يتم الإعلان عن أي تضارب في المصالح.

Materials

List of materials used in this article Name Company Catalog Number Comments ملحق McCoy's 5A متوسط (1x) مع L-Glutamine ثيرمو فيشر العلمي 16600-082 وسط الاستزراع المستخدم لخلايا HT-29 ، وتكييف وسط الثقافة مع خط الخلية المستخدم في التجارب محلول عازلة HEPES (1 متر) جمعية المحاسبين الفلسطينيين س 11-001 مكمل غذائي لماكوي 5A متوسط مصل الأبقار الجنيني الذهبي جمعية المحاسبين الفلسطينيين أ 15-151 ملحق لوسط McCoy's 5a المعدل البنسلين الستربتومايسين (100x) الغرب الحيوي L0018-100 ملحق لوسط McCoy's 5a المعدل محلول ملحي مخزن بالفوسفات (1x PBS) ثيرمو فيشر العلمي 10010-015 أكوتاز الغرب الحيوي L0950-100 محلول انفصال الخلية (زراعة الخلايا) حمام مائي جي إف إل النوع 1003 تستخدم لحلول التسخين المسبق حاضنه ثيرمو فيشر العلمي تستخدم لاحتضان الخلايا (ثقافة الخلايا) 50 مل أنابيب تفاعل VWR 525-0403 خلاط الأسطوانة ستيوارت العلمية SRT6D تستخدم لربط الخلايا بالسلك مع الحفاظ على الخلايا من الترسيب طقم تكاثر الخلايا CellTrace CFSE ثيرمو فيشر العلمي سي 34554 تستخدم لتسمية الخلايا الحية (التسمية السيتوبلازمية) هوشت: 33342 H3570 ثيرمو فيشر العلمي تستخدم لتلطيخ الحمض النووي (صبغة نواوية) جهاز طرد مركزي (مجهز لحمل أنابيب تفاعل 15 مل و 50 مل) ثيرمو فيشر العلمي هيريوس ميجافوجي 40R تستخدم لتكوير الخلايا المراقب Z1 (مجهر التشريح المجهري الفلوري / الليزر) كارل زايس التصوير المجهري مجهر مقلوب (مناعي) قادر على التشريح المجهري بالليزر. يجب أن تكون المجاهر الفلورية قادرة على اكتشاف Hoechst 33342 (مرشح DAPI) و CFSE (مرشح FITC) ألبومين مصل الأبقار (BSA) سيجما ألدريتش أ 4503-50 جرام تستخدم لطلاء الأسطح الزجاجية / البلاستيكية MS1 مينيشاكر سيجما ألدريتش Z404039 تستخدم للدوامة جهاز التفريغ CANCER03 DC03 جيلوبي جيل 003 سلك وظيفي قادر على عزل وفصل الخلايا الميثيثة الميثيثة الإيجابية (يشار إليها أيضا باسم الصيد والإفراج ، C & R) إبر الحقنة (G20) VWR 613-0554 تستخدم لثقب الأغطية المطاطية للسماح للجزء غير الوظيفي من C & R بالقيادة من خلاله غرفة نيوباور روث الطراز T729.1 تستخدم لحساب الخلايا ماصات باستور 150 مم فولاك D810 تستخدم للتطبيق المنخفض الحجم للخلايا على C & R قلم الشحوم داكو S2002 تستخدم على الشرائح الزجاجية لتثبيت تعليق الخلية في مكانه دلفيا بلاتشاكر بيركين إلمر 1296-003 تستخدم للتحريض أثناء انفصال الخلية أنابيب 1.5 مل إيبندورف 30,125,150 مجموعة Ampli1 WGA أنظمة السيليكون الحيوية يتم طلبها عبر Silicon Biosystems 0.2 مل أنابيب PCR بوزيم 710920 أجهزة الطرد المركزي الخلوي والمعدات هيتيتش عالمي 32 استخدم جهاز الطرد المركزي الخلوي في متناول اليد الدراجة الحرارية بيو راد ثنائي محرك الحمض النووي يمكن استخدام كل دراجة حرارية بغطاء ساخن أجهزة الطرد المركزي الدقيقة روث سي اكس73.1 استخدم جهاز الطرد المركزي المكتبي في متناول اليد الأشعة فوق البنفسجية ستراتالينكر 1800 ستراتاجين 400072 استخدم رابط الحمض النووي المتقاطع في متناول اليد

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Laser Capture MicrodissectionSingle Cell IsolationCytocentrifuge TechniqueCell Suspension PreparationMembrane Coated SlideUV Light TreatmentCell Lysis Master MixPCR Tube CollectionHeterogeneous Cell PopulationTarget Cell Harvesting

Related Articles