تمت مراجعة جميع الإجراءات التي تنطوي على نماذج حيوانية من قبل لجنة رعاية المؤسسية المحلية ومجلس المراجعة البيطرية JoVE.
< p class = "jove_title" >
1. الإجراء الجراحي: Xenografting كبسولة الكلى
- قبل تحريض التخدير ، راقب الفأر لضمان الصحة والرفاهية.
- ضع الفأر في الغرفة لتحريض تخدير الأيزوفلوران بنسبة 3-5٪. عندما يتوقف عن الحركة وينخفض معدل التنفس ، انتقل إلى مخروط الأنف في وضع الانبطاح ، وحافظ على التخدير عند 1-3٪.
- إذا لزم الأمر ، استخدم المقص لحلاقة الجزء الخلفي من الماوس. هذا ليس ضروريا عند استخدام الفئران الرياضية عارية (نو / نو).
- ضع ضغطا قويا على حزام القدم الخلفية الممتدة لتقييم مدى كفاية التخدير. إذا استجاب الفأر للضغط ، فستكون هناك حاجة إلى مزيد من الوقت حتى يصبح التخدير ساري المفعول. إذا لزم الأمر ، اضبط تدفق التخدير قليلا لتحقيق التخدير الكافي.
- عندما يتم تخدير الفأر بشكل كاف ، قم بتطهير موقع الجراحة بمحلول اليود الجراحي (بيتادين) متبوعا بالكحول بنسبة 70٪.
- ارتد قفازات والعباءات المعقمة ؛ ضع ستائر معقمة على موقع الجراحة. ارفع جلد الظهر بزوج من الملقط المسنن ، وباستخدام المقص الخشن ، قم بعمل شق خط الوسط الظهري 2-3 سم.
- باستخدام مقص حاد أو مسبار ، افصل الأدمة الأساسية عن جدار الجسم (على جانبي الشق للتطعيم الثنائي أو على جانب واحد للتطعيم من جانب واحد).
- أعد وضع الفأر في الوضع الجانبي وحدد موقع الكلية من خلال عرض المظهر الكلوي من خلال جدار العضلات. قد يساعد الضغط اليدوي اللطيف بإصبع الإبهام والسبابة على البطن في تصور الأعضاء الداخلية.
- باستخدام مقص قزحية العين الناعم والحرص على تجنب الأوعية الدموية الرئيسية والأعصاب الشوكية ، قم بعمل شق 1 سم في جدار الجسم بالتوازي مع العمود الفقري. قم بتوسيع هذا الشق إلى 1.5-2.0 سم (أطول قليلا من المحور الطويل للكلى) عن طريق فتح المقص برفق على نطاق أوسع بعد وضعه في الشق الأولي.
- قم بإخراج الكلية من الخارج عن طريق الضغط برفق خارج جدار العضلات على جانبي الكلى باستخدام السبابة والإبهام. دس حواف الجلد أسفل الكلية الخارجية ، والتي ستستقر على جدار الجسم. أثناء الخارج من الكلى ، حافظ على ترطيب الكبسولة الكلوية عن طريق وضع محلول ملحي معقم.
- باستخدام ملقط ناعم # 5 ، ارفع كبسولة الكلى برفق من حمة الكلى ، وباستخدام مشرط ناعم ، قم بعمل شق 2-4 مم في الكبسولة. يتم تحديد حجم الشق حسب حجم الكسب غير المشروع ولكن يجب تقليله للحفاظ على سلامة الكبسولة.
- قم بمعالجة ماصة باستور الزجاجية التي تم سحبها بشكل رقيق ومصقولة بالنار بنهاية مستديرة مغلقة أسفل الكبسولة العرضية لسطح الكلى. افتح جيبا صغيرا للطعوم برفق ، مع الحرص الشديد على عدم إتلاف حمة الكلى.
- يتم رفع الحافة المقطوعة لكبسولة الكلى بالملقط الدقيق ، ويتم إدخال الكسب غير المشروع في الجيب الموجود أسفل الكبسولة باستخدام الماصة الزجاجية المصقولة بالنار. يمكن وضع العديد من الطعوم تحت كبسولة الكلى وتباعدها بالتساوي على سطح الكلى.
- إذا أصبحت الكبسولة جافة أثناء التطعيم ، فيجب ترطيبها عن طريق وضع محلول ملحي معقم.
- عند اكتمال التطعيم ، ارفع جوانب شق جدار العضلات برفق لاستبدال الكلية مرة أخرى في تجويف الجسم. لاحظ أن الطعوم لا تنزلق من تحت الكبسولة.
- أغلق جدار العضلات بخياطة واحدة (4-0 ، FS-2 خياطة فيكريل). يمكن تكرار الإجراء الجراحي على الكلية المقابلة عن طريق تغيير موضع الفأر.
- باستخدام ملقط مسنن ، قم بمحاذاة حواف شق الجلد وقم بتطبيق 2-3 مشابك جراحية للجرح لإغلاق الشق. قم بإعطاء التسكين (نستخدم 5-10 مجم / كجم من الكاربروفين باستخدام الحقن تحت الجلد) ووضع الفأر في وضع الاستلقاء الجانبي في قفص الاسترداد. تأكد من الحفاظ على درجة حرارة الجسم بالحرارة من المصباح أو وسادة التدفئة. راقب الشفاء الكامل للماوس ، والذي يجب أن يحدث في أقل من 15 دقيقة.
- يجب ملاحظة الفئران خلال ال 24 ساعة القادمة بحثا عن علامات الألم بعد الجراحة والنزيف و / أو المضاعفات الأخرى. افحص الشقوق الجراحية بانتظام بحثا عن علامات العدوى.
- قم بإزالة مشابك الجرح باستخدام جهاز إزالة مشبك الجرح الجراحي بعد 7-14 يوما من الجراحة.
