مقالة منهجية

تشريح الأنسجة الورمية FFPE: تقنية للحصول على أنسجة سرطانية معينة من عينات غير ملوثة

أبريل 30, 2023

في هذه المقالة

الملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

المصدر: Sugimoto, K. et al. تحليل على مستوى الجينوم لمثيلة الحمض النووي في سرطان الجهاز الهضمي. J. Vis. Exp. (2020)

يصف هذا الفيديو طريقة للتشريح الكبير اليدوي للأنسجة السرطانية من عينات الأنسجة غير الملطخة للحصول على نسيج سرطاني معين. يمكن معالجة قسم الأنسجة بشكل أكبر للحصول على الحمض النووي للدراسات على مستوى الجينوم حول سرطانات الجهاز الهضمي.

البروتوكول

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1. كشط الشرائح

  1. قم بإعداد المخزن المؤقت للهضم / التحلل باستخدام 650 مل من المياه المعالجة بثنائي إيثيل بيروكربونات (DEPC) ، و 100 مل من حمض الإيثيلين ديامين تترا أسيتيك (EDTA) ، و 50 مل من هيدروكلوريد تريس (Tris-HCL) 2 M درجة الحموضة 8.8 ، و 200 مل من 10٪ كبريتات دوديسيل الصوديوم (SDS) (انظر جدول المواد).
  2. املأ أنبوب بولي بروبلين أحادي الاستخدام سعة 1.5 مل بسعة 80 ميكرولتر من المخزن المؤقت للهضم / التحلل (انظر جدول المواد).
  3. ضع طرف ماصة نظيف في المخزن المؤقت.
  4. تحديد الأنسجة السرطانية في منطقة الورم الأكثر ملاءمة للتشريح الكبير وفقا للقسم المناسب الملطخ ب H & E.
  5. تشريح الأنسجة السرطانية بناء على القسم الملطخ ب H & E.
    1. خذ شفرة حلاقة نظيفة واكشط الأنسجة السرطانية برفق من الشريحة ، محاولا الاحتفاظ بها في قطعة واحدة حتى يسهل التعامل معها.
    2. أخرج طرف الماصة من أنبوب بولي بروبلين أحادي الاستخدام يحتوي على عازل واستخدمه لنقل الأنسجة الملغوطة إلى القارورة العازلة (انظر جدول المواد).
      ملاحظة: يجب أن يجذب الطرف المبلل الأنسجة ، مما يجعل النقل أسهل.
  6. كرر الخطوة 1.5 مع بقية الشرائح.
  7. بعد أن يكون كل الأنسجة في أنبوب البولي بروبلين الذي يستخدم مرة واحدة ، استخدم الطرف للتأكد من أن الأنسجة مغمورة بالكامل وليست ملتصقة بجدار الأنبوب.
  8. أضف 20 ميكرولتر من بروتياز سيرين المرتبط بسوبتيليسين إلى القارورة وقم بنقرها برفق للخلط (انظر جدول المواد).
  9. ضع القارورة في كتلة حرارية 55 درجة مئوية لمدة 4 ساعات على الأقل أو طوال الليل. تأكد من الدوامة قليلا بعد 2 ساعة.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
لم يتم الإعلان عن أي تضارب في المصالح.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة الاسم الشركة رقم فهرسي التعليقات 10٪ كبريتات دوديسيل الصوديوم (SDS) جودة البيولوجية 351-032-721 EA المياه المعالجة DEPC جودة البيولوجية 351-068-131 حمض الإيثيلين ديامين تترا أسيتيك (EDTA) كورنينج 46-034-CL تريس هيدروكلوريد (تريس-هيدروكلوريك) 2 م درجة الحموضة 8.8 جودة البيولوجية 351-092-101 بروتيناز ك نيو إنجلاند بيولابيس P8107S أنبوب البولي بروبيلين (Eppendorf) للاستخدام الواحد إيبندورف 24533495

إعادة الطباعة والأذونات

طلب إذن لإعادة استخدام النص أو الأشكال في مقالة JoVE هذه

طلب إذن

الوسوم

FFPE H E DNA

مقالات ذات صلة