تم تنفيذ جميع الإجراءات التي تشمل مشاركين بشريين وفقا للمبادئ التوجيهية المؤسسية والوطنية والدولية لرفاه الإنسان وتم استعراضها من قبل مجلس المراجعة المؤسسية المحلي.
< ص الفئة = "jove_title" >
1. تلطيخ
- قبل الشروع في التلوين ، امسح أي محاليل زائدة حول الأنسجة الموجودة على الشريحة بالمناديل الورقية.
- ضع الشرائح في ظروف درجة حرارة الغرفة ورطوبة الغرفة لتجنب جفاف الأنسجة على الشريحة طوال عملية التلوين بأكملها.
- أكسدة الشرائح ببضع قطرات من برمنجنات البوتاسيوم لمدة 5 دقائق. تأكد من أن حجم برمنجنات البوتاسيوم كاف لتغطية قسم الأنسجة في كل شريحة.
- شطف الشرائح المؤكسدة بالماء المقطر في جرة كوبلين مع 2-3 تغييرات. راقب اللون الأزرق للأنسجة.
- الآن ، قم بتبييض هذه الشرائح عن طريق إضافة بضع قطرات من حمض الأكساليك لمدة 5 دقائق. تأكد من أن حجم حمض الأكساليك كاف لتغطية قسم الأنسجة بالكامل في كل شريحة.
- اشطف الشرائح عن طريق غمرها في جرة كوبلين المملوءة بالماء المقطر. قم بإجراء الشطف 2x-3x.
- الآن ، اغسل هذه الشرائح لفترة وجيزة في كحول 95٪ ، ثم اغمر الشرائح في محلول الإيلاستين (5 جم / لتر) لمدة 8-24 ساعة < br / >
ملاحظه: محلول الإيلاستين متطاير ، ووقت تلطيخه طويل نسبيا ، لذلك من الأفضل غمر الشرائح بتلطيخ مرن في حاوية محكمة الغلق ، مثل زجاجة زجاجية شفافة بغطاء مانع للتسرب. تعتمد سعة الحاوية وحجم محلول الإيلاستين على عدد الشرائح المغمورة ، طالما أنها تتيح الانغماس الكامل لجميع الشرائح.
- اغمر هذه الشرائح مباشرة في 95٪ من الإيثانول لمدة 1-2 دقيقة للتمييز بين كل قسم من أقسام الأنسجة جيدا.
ملاحظه: يشير التمايز إلى التغيير في شحنة قسم الأنسجة ، والذي يزيل البقع الزائدة التي تمتصها الأنسجة ويجعل الألوان أكثر وضوحا. بعد تلطيخ محلول الإيلاستين ، لا ينبغي غسل العينات بالماء المقطر لتجنب أي صعوبة في التمايز. تحقق مجهريا ، حسب الضرورة ، بحثا عن تلطيخ الألياف المرنة باللون الأزرق والأسود والخلفية الرمادية. من الأفضل أن تفرق قليلا بين الأنسجة لأن بقعة Van Gieson اللاحقة يمكن أن تستخرج إلى حد ما البقعة المرنة.
- اشطف هذه الشرائح بالكامل بالماء المقطر بعد التمايز.
قم بإزالة - الشرائح في محلول Van Gieson لمدة 1 دقيقة
ملاحظه: يجب أن يكون حجم محلول Van Gieson كافيا لتتمكن من غمر قسم الأنسجة في كل شريحة تماما.
