عزل العدلات البريتونية منخفضة الكثافة: تقنية للحصول على العدلات منخفضة الكثافة من سائل الغسيل البريتوني باستخدام فرز الخلايا المنشطة المغناطيسية

الملخص

المصدر: Kanamaru, R. et al. مصائد العدلات خارج الخلية الناتجة عن العدلات منخفضة الكثافة التي تم الحصول عليها من سائل الغسيل البريتوني تتوسط نمو الخلايا السرطانية والتعلق بها. J. Vis. Exp. (2018)

في هذا الفيديو ، نصف إجراء عزل العدلات منخفضة الكثافة ، أو LDNs ، من سائل الغسيل البريتوني لمريض بشري بعد الجراحة. يمكن استخدام LDNs التي تم الحصول عليها بهذه الطريقة في المزيد من التجارب النهائية لفهم دورها في نمو الورم وتطوره.

البروتوكول

تم تنفيذ جميع الإجراءات التي تشمل مشاركين بشريين وفقا للمبادئ التوجيهية المؤسسية والوطنية والدولية لرفاه الإنسان وتم استعراضها من قبل مجلس المراجعة المؤسسية المحلي.

فئة

1. عزل LDN من غسل تجويف البطن

1. الحصول على عينة
   قم
   1. بضخ 1,000 مل من محلول ملحي معقم طبيعي مباشرة في تجويف البطن قبل إغلاق الجرح لدى المرضى الذين خضعوا لعملية جراحية في البطن بسبب الأورام الخبيثة المعدية المعوية.
      ملاحظه: تم الحصول على عينات من المرضى الذين خضعوا لاستئصال المعدة أو استئصال القولون أو استئصال المريء دون تحيز على أساس العمر أو الجنس. تم نقل المحلول الملحي إلى وعاء وسكبه في البطن بالكامل في غضو....

النتائج

الشكل 1: تكوين NET بعد ثقافة LDN البريتوني. (أ)بعد الطرد المركزي المتدرج للكثافة لسائل الغسيل بعد الجراحة ، يتم عرض الخلايا المستردة من الطبقة الوسيطة. (ب) بعد ذلك ، تم فصل CD66b (+) LDN عن الخلايا أحادية النواة CD66b (-) وتم زراعتها على ألواح 6 آبار مطلية ب poly-L-lysine ، متبوعة بإضافة صبغة تلطيخ نووية ومراقبة فورية باستخدام المجهر الفلوري. (ج) تم ز.......

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة الاسم الشركة رقم فهرسي التعليقات فيكول باك بلس جنرال إلكتريك للرعاية الصحية ، السويد 17-1440-02 StraightFrom™ الدم الكامل CD66b MicroBeads Miltenyi Biotec ، Bergisch Gladbach ، ألمانيا 130-104-913 كتلة Fc Miltenyi Biotec ، Bergisch Gladbach ، ألمانيا 130-059-901 حل شطف MACS Miltenyi Biotec ، Bergisch Gladbach ، ألمانيا 130-091-222 محلول 0.5 مول / لتر EDTA (درجة الحموضة 8.0) ناكالاي تيسك ، اليابان 06894-14 حل مخزون MACS BSA Miltenyi Biotec ، Bergisch Gladbach ، ألمانيا 130-091-376 أعمدة LS Miltenyi Biotec ، Bergisch Gladbach ، ألمانيا 130-041-306 MACS فاصل مغناطيسي Miltenyi Biotec ، Bergisch Gladbach ، ألمانيا 130-042-501