التقطيع والتلوين وتصوير TEM للإكسوسومات المدمجة: بروتوكول لتصور السمات الهيكلية للإكسوسومات باستخدام TEM

الملخص

المصدر: Jung، M. K. et al. إعداد عينة وتصوير الإكسوسومات عن طريق المجهر الإلكتروني للإرسال. J. Vis. Exp. (2018)

يصف هذا الفيديو تقنية تحضير قسم رفيع من الإكسوسومات المضمنة. يمكن تلطيخ هذه الأقسام وتصويرها باستخدام المجهر الإلكتروني للإرسال ، أو TEM ، لدراسة السمات الهيكلية للإكسوسومات.

البروتوكول

< p class = "jove_title" >1. تقسيم الإكسوسومات

1. قم بإعداد كتلة الإكسوسوم عن طريق تضمين عينة الإكسوسوم المنقاة (التي تم الحصول عليها من المادة الطافية للثقافة لخلايا HCT116) في خليط تضمين نقي منخفض اللزوجة.
2. قسم كتلة الإكسوسوم بسمك 60 نانومتر من خلال ميكروتوم فائق.
3. بقعة مزدوجة مع أسيتات اليورانيل 2٪ لمدة 20 دقيقة وسيترات الرصاص لمدة 10 دقائق
   بالنسبة لمحلول الرصاص من رينولدز، أضف 1.33 جم من نترات الرصاص و 1.76 جم من سترات الصوديوم إلى إجمالي 50 مل من الماء المقطر.
4. راقب الشبكة تحت المجهر الإلكتروني للإرسال عند 80 كيلو فولت.
5. انقر فوق "اكتساب" ثم انقر فوق "ملف" و "حفظ باسم" في نظام كاميرا CCD تحت المجهر الإلكتروني عند 80 كيلو فولت. اتبع الإعدادات التلقائية لوقت التعرض.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة الاسم الشركة رقم فهرسي التعليقات ميكروتوم فائق لايكا UCT أسيتات يورانيل EMS 22400 مادة كيميائية خطرة سترات الرصاص EMS 17900 الفحص المجهري الإلكتروني للإرسال هيتاشي H7600 شبكة النيكل EMS G200-Ni شبكة نحاسية EMS G200-Cu الفحص المجهري الإلكتروني للإرسال جول JEM2200FS