Method Article

التقطيع والتلوين وتصوير TEM للإكسوسومات المدمجة: بروتوكول لتصور السمات الهيكلية للإكسوسومات باستخدام TEM

April 30th, 2023

In This Article

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

المصدر: Jung، M. K. et al. إعداد عينة وتصوير الإكسوسومات عن طريق المجهر الإلكتروني للإرسال. J. Vis. Exp. (2018)

يصف هذا الفيديو تقنية تحضير قسم رفيع من الإكسوسومات المضمنة. يمكن تلطيخ هذه الأقسام وتصويرها باستخدام المجهر الإلكتروني للإرسال ، أو TEM ، لدراسة السمات الهيكلية للإكسوسومات.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
< p class = "jove_title" >1. تقسيم الإكسوسومات

  1. قم بإعداد كتلة الإكسوسوم عن طريق تضمين عينة الإكسوسوم المنقاة (التي تم الحصول عليها من المادة الطافية للثقافة لخلايا HCT116) في خليط تضمين نقي منخفض اللزوجة.
  2. قسم كتلة الإكسوسوم بسمك 60 نانومتر من خلال ميكروتوم فائق.
  3. بقعة مزدوجة مع أسيتات اليورانيل 2٪ لمدة 20 دقيقة وسيترات الرصاص لمدة 10 دقائق
    بالنسبة لمحلول الرصاص من رينولدز، أضف 1.33 جم من نترات الرصاص و 1.76 جم من سترات الصوديوم إلى إجمالي 50 مل من الماء المقطر.
  4. راقب الشبكة تحت المجهر الإلكتروني للإرسال عند 80 كيلو فولت.
  5. انقر فوق "اكتساب" ثم انقر فوق "ملف" و "حفظ باسم" في نظام كاميرا CCD تحت المجهر الإلكتروني عند 8....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
لم يتم الإعلان عن أي تضارب في المصالح.

Materials

List of materials used in this article Name Company Catalog Number Comments ميكروتوم فائق لايكا UCT أسيتات يورانيل EMS 22400 مادة كيميائية خطرة سترات الرصاص EMS 17900 الفحص المجهري الإلكتروني للإرسال هيتاشي H7600 شبكة النيكل EMS G200-Ni شبكة نحاسية EMS G200-Cu الفحص المجهري الإلكتروني للإرسال جول JEM2200FS

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Exosome SectioningTransmission Electron MicroscopyUranyl Acetate StainingLead Citrate StainingUltra microtome SectioningNickel Grid PreparationExosome Imaging ProtocolExosome Structural AnalysisTEM Sample PreparationExosome Visualization

Related Articles