مقالة منهجية

التلوين السلبي للإكسوسومات المنقاة: إجراء لتصور مورفولوجيا الإكسوسوم باستخدام المجهر الإلكتروني للإرسال

أبريل 30, 2023

في هذه المقالة

الملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

المصدر: Jung، M. K. et al. إعداد عينة وتصوير الإكسوسومات عن طريق المجهر الإلكتروني للإرسال. J. Vis. Exp. (2018)

يصف هذا الفيديو إجراء للتلوين السلبي للإكسوسومات المنقاة. يتم تصوير الإكسوسومات الملطخة سلبا باستخدام المجهر الإلكتروني الناقل. تساعد هذه التقنية في تصور مورفولوجيا الإكسوسوم.

البروتوكول

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
< ص الفئة = "jove_title" >1. تلطيخ سلبي

  1. توهج تفريغ الشبكات الرقيقة / الكربون المطلية بفيلم الكربون 200 شبكة من النحاس EM لمدة 1 دقيقة بواسطة مفرغ التوهج.
  2. قم بإصلاح الإكسوسومات المنقاة ب 1 مل من 2٪ بارافورمالدهيد (PFA) لمدة 5 دقائق
    ملاحظة: أبخرة بارافورمالدهيد سامة. يجب أن يتم كل العمل في غطاء دخان جيد التهوية.
  3. قم بتحميل محلول تعليق الإكسوسوم 5-7 ميكرولتر على الشبكة واحتضانه لمدة 1 دقيقة. إذا كان تركيز الإكسوسوم مرتفعا جدا ، فقم بتخفيف التركيز إلى النصف إلى الخمس.
    4. قم
  4. بتلطيخ البقع على الفور ب ~ 20 قطرة من محلول أسيتات اليورانيل (UA) المصفى بنسبة 1٪ على سطح شبكة EM بواسطة حقنة.
  5. قم بإزالة محلول UA الزائد على الشبكة عن طريق الاتصال بحافة الشبكة بورق التصفية.
  6. شطف الشبكة بسرعة مع قطرة من الماء. ستزيل هذه الخطوة محلول التلوين الزائد.
  7. ضع الشبكة على الطاولة عن طريق إمساكها بالملاقط ، وقم بتغطية الشبكة جزئيا بطبق ثقافة حتى تجف لمدة 10 دقائق تحت درجة حرارة الغرفة.
  8. قم بتخزين الشبكة في صندوق شبكة EM للمراقبة المستقبلية بواسطة TEM عند 80 كيلو فولت.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
لم يتم الإعلان عن أي تضارب في المصالح.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة الاسم الشركة رقم فهرسي التعليقات أسيتات يورانيل EMS 22400 مادة كيميائية خطرة الفحص المجهري الإلكتروني للإرسال جول JEM2200FS مفرغ التوهج جول JFC1100E بارافورمالدهيد EMS 19210 فورمفار الكربون المغلفة النحاس
الشبكة (200 شبكة) EMS FCF200-CU فورمفار الكربون المغلفة النيكل
الشبكة (200 شبكة) EMS FCF200-NI

إعادة الطباعة والأذونات

طلب إذن لإعادة استخدام النص أو الأشكال في مقالة JoVE هذه

طلب إذن

الوسوم

مقالات ذات صلة