تحضير الجبل الكامل لأمعاء الفأر: باستخدام جهاز شق بسيط لتحضير الحامل بالكامل

الملخص

المصدر: Yoneda، M. et al. جهاز بسيط لتحضير حوامل كاملة من أمعاء الفأر بسرعة. J. Vis. Exp. (2015)

في هذا الفيديو ، نوضح التحضير الكامل لأمعاء الفأر باستخدام جهاز بسيط لشق الأمعاء. تتميز الحوامل الناتجة بجودة عالية وموحدة ويمكن استخدامها في التحليلات النسيجية.

البروتوكول

تمت مراجعة جميع الإجراءات التي تنطوي على نماذج حيوانية من قبل لجنة رعاية المؤسسية المحلية ومجلس المراجعة البيطرية JoVE.

1. الجهاز

1. قم بآلة الجزء الرئيسي من قاعدة الجهاز من كتلة صلبة من راتنج الأسيتيل عالي الكثافة ، كما هو موضح في هذه المخطوطة. في كل طرف ، قم بإنشاء شرائط مرتفعة بارتفاع 3 مم وقم بقطع الماكينة من هذه الأخاديد مقاس 2.5 مم لأخذ القضبان (انظر الشكل 1 والشكل 2).
2. اصنع قضبان من الفولاذ المقاوم للصدأ بقطر 2.4 مم بنهايات مستديرة.
ملاحظه:تم تشكيل الإطار الرئيسي للغطاء من لوحة Duralumin.

2. استخدام الجهاز

1. قم بتشريح الأمعاء الدقيقة والقولون من تجويف البطن باستخدام المقص والأصابع التي ترتدي القفازات. قم بإزالة المساريق عن طريق إمساكه بالملقط المنحني وسحبه برفق بعيدا عن الأمعاء.
2. اشطف الأمعاء بمحلول ملحي بارد مخزن بالفوسفات (PBS ، درجة الحموضة 7.4) باستخدام طرف ماصة من نوع جيلسون ، والذي تم قطعه في نهايته الأوسع بحيث يمكن وضعه على حقنة بلاستيكية مناسبة للير سعة 10 أو 20 مل.
3. ضع الأمعاء الدقيقة (SB) على ورقة من المناديل الورقية وقسمها إلى ثلاثة أقسام متساوية في الطول (القريبة والمتوسطة والبعيدة - SB1 و SB2 و SB3) باستخدام المقص. قم بإزالة الأعور ووضع القولون.
4. قم بعمل عدة جروح صغيرة جدا في أجزاء الأمعاء بالمقص للسماح للسائل بالخروج وضع ورقة من المناديل الورقية فوق الأمعاء وقم بتمرير إصبعك برفق على المستحضرات للضغط على السائل وجفافه.
5. ارفع الأقسام وأدخل قضبان الفولاذ المقاوم للصدأ التي تم ترطيبها مسبقا عن طريق النقع في دورق من المحلول الملحي المخزن بالفوسفات.
   ملاحظه: يمكن قلب الأمعاء إذا رغبت في ذلك (قلبها من الداخل إلى الخارج).
6. قم بتسمية قطعة من البطاقة أو ورق الترشيح مقطوعا حسب الحجم لتلائم قاعدة الجهاز. قلم رصاص هو الأفضل ، لأنه لا يتأثر بجميع الحلول تقريبا. يقترح تاريخ تشريح الجثة والرمز التجريبي ورقم تعريف.
7. ضع البطاقة أو ورق الترشيح في قاعدة الجهاز. أدخل القضبان والأمعاء في الفتحات الموجودة في قاعدة الجهاز. تأكد من وضع الطرف القريب من الأجزاء بطريقة موحدة. يجب أن تكون الأطراف القريبة بالقرب من ملصقات البطاقة.
8. ضع القطعة العلوية من الجهاز فوق القاعدة. استخدم القضبان المائلة لتوجيه شفرة مشرط لقطع الأقسام طوليا.
   ملاحظه: من المفيد أن يتم إمساك الأنسجة برفق وبعناية بإصبع للتأكد من أنها لا تتحرك بالسكين.
9. قم بإزالة الجزء العلوي من الجهاز. قم بإزالة ورق الترشيح والمناديل بعناية (لا تزال على قضبانها).
   ملاحظه: ستساعد قطعة من البطاقة الصلبة الموضوعة أسفل ورق الترشيح في الرفع.
10. مبلل قليلا (بطرف إصبع مرتدي قفاز مغموس في PBS) الشرائح. لف القضيب ، جنبا إلى جنب ، لفتح القناة الهضمية ونشرها بشكل مسطح. سوف تلتصق الأنسجة بعد ذلك بورق الترشيح.
11. افحص بصريا الاستعدادات لأي آفات جسيمة.
12. انقل المنديل اللاصق بورق الترشيح إلى حمام ضحل (أو صندوق شطيرة) يحتوي على مثبت.
    ملاحظه: بعد أن تلتصق الأنسجة بورق الترشيح أو بالبطاقة ، ستظل مثبتة بإحكام. يمكن استخدام مجموعة واسعة من المثبتات للحفاظ على المستحضر. يوصى باستخدام سائل كارنوي لدراسة تكاثر الخلايا المعوية ، وهو التثبيت المثالي لأفضل طرق تكاثر الخلايا ؛ ومع ذلك ، يمكن أيضا استخدام الفورمالين أو العديد من المثبتات الأخرى إذا كانت نقاط النهاية الأخرى مطلوبة.
13. بعد التثبيت (عادة 3 ساعات) ، انقل المستحضرات إلى 70٪ من الإيثانول. يمكن بعد ذلك تخزين العينات حتى الحاجة. يمكن دراسة المستحضرات وجها لوجه و / أو استخدامها لإعداد عينات نسيجية ل H & E أو تقنيات التلوين النسيجية الأخرى ، والكيمياء المناعية ، و / أو التهجين في الموقع.
    ملاحظه: يمكن أن يقلل التثبيت المطول من التفاعل الكيميائي المناعي و / أو تفاعل التهجين في الموقع. تعتبر علب شطيرة البولي بروبلين مثالية لتخزين عدد كبير من المستحضرات.
14. إذا لزم الأمر ، يمكن تحويل الأنسجة الثابتة من الأجزاء المعوية المختلفة إلى "لفائف سويسرية "وتلطيخها بمجموعة كاملة من الطرق النسيجية ، بما في ذلك تلك الموضحة أعلاه. لعمل "لفة سويسرية "، تتم إزالة الأجزاء المعوية من ورق الترشيح ، ولفها حول عصا كوكتيل أو عود أسنان ، وتثبيتها بدبوس حشري ، ومعالجتها لتضمين الشمع.
15. إذا لزم الأمر ، قم بتلطيخ الأنسجة السائبة باللون الأزرق الميثيلين لتصور بؤر القبو الشاذة.
16. سجل الاستعدادات الثابتة في أوقات الفراغ.

النتائج

الشكل 1. صور الجهاز الأصلي.تم بناء الجهاز الأصلي من عدة قطع معدنية ، معدة يدويا. (أ) الجهاز المجمع. (ب) تمت إزالة الجزء العلوي من الجهاز لإظهار القضبان في موضعها.

الشكل 2. صور الجهاز المعاد تصميم...

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة الاسم الشركة رقم فهرسي التعليقات ديلرين ريان بلاستيك ، إيرلز بارتون ، المملكة المتحدة راتنج الأسيتال عالي الكثافة مادة مماثلة تكفي لوحة Duralumin الإمدادات المعدنية المحدودة ، طريق بارك ، دوكينفيلد. SK16 5LP المملكة المتحدة يسمح الألمنيوم بيعود تاريخه إلى عام 1909 ، لذا يتوفر موردون بدائل الجهاز (الأجهزة) النهائية جاهزة للاستخدام اتصل ب Dr Goodlad r.goodlad@imperial.ac.uk اتصل r.goodlad@imperial.ac.uk للحصول على تفاصيل التوريد