تمت مراجعة جميع الإجراءات التي تنطوي على نماذج حيوانية من قبل لجنة رعاية المؤسسية المحلية ومجلس المراجعة البيطرية JoVE.
فئة
1. حقن الخلايا في الفئران
- قم بإعداد خليط 1: 1 من الخلايا: مصفوفة الغشاء القاعدي (50 ميكرولتر لكل منهما).
- أضف الخلايا أولا ؛ ثم قم بتقطيع مصفوفة الغشاء القاعدي تدريجيا. تجنب إدخال فقاعات الهواء. تأكد من أن الخليط يصنع مباشرة قبل حقن. يمكن أن تؤدي إضافة الخلايا إلى مصفوفة الغشاء القاعدي لفترة طويلة من الزمن إلى استقرار الخلايا في خليط المصفوفة ، مما يجعل من الصعب رج الخليط بقوة. سيؤدي ذلك إلى تباين كبير في حجم الورم بين الفئران.
- تخلط بلطف. تأكد من تنفيذ جميع الخطوات التي تنطوي على المصفوفة على الجليد. سوف تتبلمر مصفوفة الغشاء القاعدي في درجة حرارة الغرفة.
- تحضير المحاقن للتلقيح.
- قم بتحميل 0.5 مل من محاقن الأنسولين (23 جم) مع 100 ميكرولتر من محلول مصفوفة الخلية / الغشاء القاعدي.
- احتفظ بالمحاقن على الجليد لتجنب بلمرة مصفوفة الغشاء القاعدي.
- تخدير الفئران عن طريق وضعها في غرفة بها الأيزوفلوران والأكسجين (2.5٪).
- تأكد من تخدير الفئران بعمق قبل إجراء الحقن (عن طريق ضمان عدم الاستجابة لقرص إصبع القدم).
- أدخل الإبرة في منطقة الخد اليمنى أو اليسرى. يتم تنفيذ ذلك من خلال المساحة المفتوحة المتاحة على جانبي الفم.
- تأكد من أن لسان الماوس ليس في الطريق.
ملاحظة: من السهل وخز اللسان ، مما يؤدي إلى أورام اللسان. حرك اللسان إلى الجانب الآخر إذا لزم الأمر.
- حافظ على المحقنة موازية لمنطقة الخد داخل تجويف الفم.
- عندما تكون جاهزا للحقن ، اسحب المحقنة للخلف وأدخل المحقنة ببطء بزاوية 10 درجات.
- حقن 100 ميكرولتر من تعليق مصفوفة الخلية / الغشاء القاعدي على مدى 5 ثوان.
- امسك المحقنة في مكانها لمدة 5 ثوان إضافية لضمان حقن جميع المواد.
ملاحظة: للسيطرة على الفئران غير الحاملة للأورام ، قم بحقن خليط من الوسائط المصلية والمصفوفة (كما هو موضح أعلاه) بدون الخلايا السرطانية.
- اسحب المحقنة برفق.
- استمر في الإجراء أعلاه مع الفئران المتبقية.
- اسمح لمدة أسبوع واحد حتى تبدأ الأورام في الظهور بشكل جسيم (50-200 مم3 لخلايا B4B8 و LY2).
