حصاد غشاء الفصيلة النارية للكتيكوت: طريقة لعزل غشاء المشيمة اليمي الحامل للورم من بيض الدجاج

الملخص

< p class = "jove_content" >المصدر: Schmidt ، L. B. et al. الغشاء المشيمي في الجسم الحي لتقييم الغزو المحيط بالعصب في سرطان الرأس والرقبة. J. Vis. Exp. (2019)

يوضح هذا الفيديو عزل الغشاء المشيمي الحامل للورم عن جنين الدجاج. يمكن استخدام CAM المحصود لمزيد من التطبيقات النهائية.

البروتوكول

تمت مراجعة جميع الإجراءات التي تنطوي على نماذج حيوانية من قبل لجنة رعاية المؤسسية المحلية ومجلس المراجعة البيطرية JoVE.

< p class = "jove_title" >1. حصاد CAM

1. قم بإعداد أطباق مكونة من 6 آبار بدرجة حموضة 4٪ PFA (بارافورمالدهايد) 7.0 ؛ بئر واحد لكل بيضة ، 2 مل لكل بئر.
2. أحضر البيض إلى مقعد المختبر. باستخدام إبرة متصلة بحقنة لتثقيب ضمادة الفيلم ، قم بإسقاط حوالي 300 ميكرولتر من PFA فوق CAM لتقوية CAM قليلا ، وبالتالي تسهيل عملية الحصاد. كرر هذا لجميع البيض.
3. باستخدام مقص ، قم بإزالة النصف العلوي من قشر البيض (حيث توجد نافذة التشغيل) مع توصيل CAM به (الشكل 1I). قلل حجم هذا النصف إلى قطره 3 سم تقريبا. أمسك الكام بالملقط الدقيق وافصله عن قشر البيض أثناء وضعه في PFA.

النتائج

p class = "jove_content" fo: keep-together.within-page = "1" >
الشكل 1: تطعيم DRG والخلايا وحصاد CAM: في اليوم 8: أ. يمكن ملاحظة CAM بسهولة بعد إزالة غشاء شمع البارافين. BC. باستخدام ملقط دقيق ، يتم وضع DRG على CAM. د. البيض مغطى بصلصة الفيلم ويوضع في الحاضنة. تشير الأسهم إلى الفتحات التي يتم تغطيتها. في اليوم 10: E-F. تتم إزالة ضمادة الفيلم ويقع DRG (رأس السهم على F). جي ح.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة الاسم الشركة رقم فهرسي التعليقات PFA (محلول بارافورمالدهايد) سيجما ألدريتش # P6148-1 كجم خفف في الماء لعمل محلول 4٪ PFA مقص حاد جراحي مستقيم ناعم أدوات العلوم الدقيقة (FST) # 14060-09 تستخدم لحصاد أنسجة الطب التكبديل في اليوم 17 بيض لومان الأبيض المخصب البويضات المخصبة في أيام الإخصاب المبكرة ، ويفضل أن يكون ذلك في اليوم الأول بعد الإخصاب. البيض المستخدم في هذا البروتوكول من مزرعة دواجن جامعة ولاية ميشيغان ملقط Graefe ناعم للغاية ، مستقيم أدوات العلوم الدقيقة (FST) # 11150-10 تستخدم لتطعيم DRG على CAM في اليوم 8 ولحصاد أنسجة CAM في اليوم 17