نمذجة العلاج داخل الورم بمثبطات الحمض النووي الريبي: طريقة لتحليل تأثير مثبطات الحمض النووي الريبي المرسال على نمو الورم في نموذج الفئران

الملخص

المصدر: Ramirez-Moya ، J. et al. في الجسم الحي تثبيط microRNA لتقليل نمو الورم في الفئران. J. Vis. Exp. (2019)

يوضح هذا الفيديو التوصيل في الجسم الحي لمثبطات miRNA كعوامل علاجية ضد نمو الورم في نماذج الفئران التقويمية. يسمح الإعطاء داخل الورم لمثبطات miRNA الاصطناعية أو antagomiRs بربط وتثبيط miRNAs الداخلية ، مما يتسبب في تنظيم mRNA وقمع نمو الورم.

البروتوكول

تمت مراجعة جميع الإجراءات التي تنطوي على نماذج حيوانية من قبل لجنة رعاية المؤسسية المحلية ومجلس المراجعة البيطرية JoVE.

< p class = "jove_title" >1. تلقيح الجناح للخلايا وعلاج antagomiR داخل الورم

1. تحضير الخلية
   1. قم بهندسة خط خلايا سرطان الغدة الدرقية البشرية Cal62 (طفرات KRASG12R و p53A161D) للإفراط في التعبير عن بنية معدلة وراثيا تعبر بشكل أساسي عن GFP و luciferase (CMV-Firefly Luc-IRES-eGFP). حدد الخلايا المعدلة وراثيا عن طريق مقاومة المضادات الحيوية أو عن طريق فرز الخلايا الإيجابية ل GFP باستخدام قياس التدفق الخلوي.
   2. قم بزراعة الخلايا في وسط النسر المعدل (DMEM) من Dulbecco المكمل بالبنسلين والستربتومايسين وم....

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة الاسم الشركة رقم فهرسي التعليقات مصفوفة الغشاء القاعدي: مصفوفة غشاء القاعدة Matrigel تركيز عال كورنينج #354248 AntagomiR: مثبط mirVana miRNA ثيرمو فيشر 4464088 جاهز في الجسم الحي كاشف التسليم في الجسم الحي: كاشف Invivofectamine 3.0 ثيرمو فيشر التلقيح الاصطناعي 3005 التحكم السلبي: مثبط mirVana miRNA ، التحكم السلبي # 1 ثيرمو فيشر 4464077 جاهز في الجسم الحي XenoLight D-Luciferin - ركيزة الملح الحيوي K + بيركين إلمر 122799 مخفف في PBS برنامج التصوير في الجسم الحي: نظام التصوير IVISLumina II علوم الحياة الفرجار