التلقيح التقويمي لخلايا سرطان الغدة الدرقية في الغدة الدرقية الفئرانية: إجراء لإنشاء نموذج فأر سرطان الغدة الدرقية لتقويم العظام

الملخص

المصدر: Julia Ramirez-Moya، et al. In Vivo Inhibition of microRNA لتقليل نمو الورم في الفئران.

يصف هذا الفيديو إجراء التلقيح التقويمي لخلايا سرطان الغدة الدرقية في الغدة الدرقية لنماذج الفئران ، والتي قد تكون بمثابة منصة قيمة لتقييم التسرطن واكتشاف استراتيجيات العلاج المحتملة.

البروتوكول

تمت مراجعة جميع الإجراءات التي تنطوي على نماذج حيوانية من قبل لجنة رعاية المؤسسية المحلية ومجلس المراجعة البيطرية JoVE.

< p class = "jove_title" >1. تلقيح الخلايا بتقويم الغدة الدرقية

1. تحضير الخلية
   1. قم بهندسة خط خلايا سرطان الغدة الدرقية البشرية Cal62 للإفراط في التعبير عن بنية معدلة وراثيا تعبر بشكل أساسي عن GFP و luciferase. حدد الخلايا المعدلة وراثيا عن طريق مقاومة المضادات الحيوية أو عن طريق فرز الخلايا الإيجابية ل GFP باستخدام قياس التدفق الخلوي.
   2. قم بزراعة هذه الخلايا في DMEM المكملة بالمضادات الحيوية (البنسلين والستربتومايسين) و 10٪ FBS عند 37 درجة مئوية و 5٪ ثاني أكسيد_{الكربون 2}.
   3. قم بتعليق 1 × 10⁵ خلايا في 5 ميكرولتر من PBS.
2. تلقيح الخلايا في الغدة الدرقية للفئران
   1. حقن 100 ميكرولتر من مسكن (بوبرينورفين) و 100 ميكرولتر من المضاد الحيوي (سيفالوسبورين) تحت الجلد في فئران BALB/c nu/nu البالغة من العمر 7 أسابيع. تطهير مكان الحقن بالكحول.
   2. حقن 5 ميكرولتر من محلول الخلية في الغدة الدرقية للفئران.
      1. قم بتخدير الفأر باستخدام 3٪ من الأيزوفلوران الممزوج بالأكسجين ووضعه تحت مجهر مجسم في خزانة تدفق معقمة. قم بتقييم مستوى التخدير عن طريق منعكس الدواسة (قرصة إصبع القدم الثابتة) وضبط توصيل التخدير حسب الاقتضاء للحفاظ على المستوى الجراحي.
      2. ضع مرهم العين على كلتا العينين لمنع الجفاف.
      3. لكل فأر ، قم بتطهير الرقبة باليودوبوفيدون وقم بعمل شق بطول 2 سم تقريبا في الجلد بالمقص. بمجرد فتحه ، قم بتعريض الرقبة عن طريق إزاحة الغدد اللعابية.
      4. قم بتشريح عضلات الحزام باستخدام ملقط التشريح و / أو المقص لكشف القصبة الهوائية والغدة الدرقية. باستخدام حقنة سعة 10 ميكرولتر ، قم بحقن 5 ميكرولتر من محلول الخلية في فصيص الغدة الدرقية الأيمن ، الموجود على جانب الغضروف الحلقي.
      5. أعد وضع الغدد اللعابية وخياطة الشق بالحرير باستخدام خيوط مضفرة ومغلفة وغير قابلة للامتصاص.
      6. أضف اليودوبوفيدون إلى منطقة الجرح وضع الفأر على بطانية حرارية أثناء تعافيه من التخدير.
   3. في اليوم التالي بعد الجراحة ، قم بحقن المسكن تحت الجلد (بوبرينورفين) وأضف 3 مل من الإيبوبروفين السائل (40 مجم / مل) في 250 مل من مياه الشرب لمدة أسبوع واحد.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة الاسم الشركة رقم فهرسي التعليقات مصفوفة الغشاء القاعدي: مصفوفة غشاء القاعدة Matrigel تركيز عال كورنينج #354248 كاشف التسليم في الجسم الحي: كاشف Invivofectamine 3.0 ثيرمو فيشر IVF3005 برنامج التصوير في الجسم الحي: نظام التصوير IVIS-Lumina II علوم الحياة الفرجار