ميثيل ثيازوليل تيترازوليوم أو اختبار MTT: اختبار لوني لقياس مقاومة الأدوية عن طريق تحديد النشاط الأيضي في الخلايا السرطانية

الملخص

المصدر: Sciarrillo, R. et al. استخدام تسلسل الحمض النووي الريبي للكشف عن متغيرات لصق جديدة تتعلق بمقاومة الأدوية في نماذج السرطان في المختبر. J. Vis. Exp. (2016)

يصف هذا الفيديو الاختبار اللوني ، مقايسة ميثيل ثيازول تيترازوليوم (MTT) ، لقياس السمية الخلوية التي يسببها الدواء في الخلايا السرطانية وتحديد نشاطها الأيضي. يعتمد هذا الاختبار على التحويل الأيضي لأملاح التيترازوليوم إلى منتجات ملونة ، مما يعكس نشاط الميتوكوندريا للخلايا.

البروتوكول

1. فحص MTT لخلايا سرطان الدم

1. قم بإعداد محلول MTT مسبقا: قم بإذابة 500 مجم من فورمازان MTT في 10 مل PBS وحركها (محمية من الضوء) باستخدام محرك مغناطيسي لمدة 1 ساعة تقريبا. عقم المحلول بمرشح 0.22 ميكرومتر.
   ملاحظه: يمكن تخزين المحلول في 10 مل عند -20 درجة مئوية.
2. قم بإعداد الأيزوبروبانول المحمض مسبقا: أضف 50 مل من 2 مل حمض الهيدروكلوريك إلى 2.5 لتر من الأيزوبروبانول.
   ملاحظه: قم بتخزين المحلول لمدة شهر على الأقل في درجة حرارة الغرفة قبل الاستخدام. إذا لم يتم تحمض الأيزوبروبانول بشكل صحيح ، فقد يشكل رواسب مع الوسط ويضر بالقراءة الطيفية الضوئية.
3. قم بإعداد لوحة منفصلة ذات قاع ....

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة الاسم الشركة رقم فهرسي التعليقات CCRF-CEM ATCC ، ماناساس ، فيرجينيا ، الولايات المتحدة الأمريكية ATCC CCL-119 RPMI-1640 جيبكو ، كارلسباد ، كاليفورنيا ، الولايات المتحدة الأمريكية 11875093 مصل الأبقار والعجل الجنين Greiner Bio-One, Frickenhausen, ألمانيا 758093 بنسلين جي ستربتومايسين كبريتات جيبكو ، كارلسباد ، كاليفورنيا ، الولايات المتحدة الأمريكية 15140122 تريس (هيدروكسي ميثيل) - أمينوميثان سيجما ألدريتش 252859 قوارير ثقافة الخلايا CELLSTAR 25 سنتيمتر مربع Greiner Bio-One, Frickenhausen, ألمانيا 82051-074 MTT formazan سيجما ألدريتش M2003 أنثوس إليسا ريدر 2001 Labtec, Heerhugowaard, هولندا مقياس الطيف الضوئي للوحة UV-Vis 96 جيدا Greiner CELLSTAR 96 ألواح بئر غرينر / سيجما M0812-100EA محلول ملحي مخزن بالفوسفات (كلوريد الصوديوم 0.9٪) B.Braun Melsungen AG ، ألمانيا 362 3140 محلول التربسين / EDTA 100 مل لونزا ، بازل ، سويسرا سي سي -5012