Method Article

فحص موت الخلايا باستخدام تلطيخ DAPI: طريقة للفحص السريع لموت الخلايا المستنسخة الناجم عن الأشعة تحت الحمراء في خطوط الخلايا السرطانية

April 30th, 2023

In This Article

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

المصدر: Kobayashi ، D. et al. بروتوكول من خطوة واحدة لتقييم طريقة موت الخلايا المستنسخة الناجم عن الإشعاع عن طريق المجهر الفلوري. J. Vis. Exp. (2017)

يوضح هذا الفيديو منهجية فحص ملفات تعريف موت الخلايا الرئيسية في خطوط الخلايا السرطانية التي يسببها الإشعاع المؤين (IR) باستخدام مقايسة تلطيخ DAPI. تظهر النوى الملطخة ب DAPI للخلايا المستهدفة التي تخضع لموت الخلايا مورفولوجيا مميزة ويمكن التعرف عليها بسهولة عن طريق الفحص المجهري الفلوري.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
< p class = "jove_title" >1. تحضير المواد

  1. أغطية الأوتوكلاف
    1. ضع أغطية في دورق زجاجي.
    2. غطي الدورق الزجاجي بورق الألمنيوم.
    3. الأوتوكلاف عند 121 درجة مئوية عند 15 رطل لكل بوصة مربعة لمدة 20 دقيقة.
    4. يجف عند 50 درجة مئوية. يحفظ في درجة حرارة الغرفة في غطاء للثقافة.
  2. تحضير محلول التثبيت: 3٪ بارافورمالدهيد + 2٪ سكروز في محلول ملحي مخزن بالفوسفات (PBS)
    1. إلى زجاجة زجاجية سعة 1,000 مل ، أضف 700 مل PBS و 30 جم بارافورمالدهايد.
      أنذر: بارافورمالديهايد تآكل ، ارتد قفازات مناسبة.
    2. قم بإذابة بارافورمالدهيد تماما عن طريق التسخين إلى 80 درجة مئوية باستخدام الميكروويف.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
لم يتم الإعلان عن أي تضارب في المصالح.

Materials

List of materials used in this article Name Company Catalog Number Comments زلة الغطاء ماتسونامي C013001 بارافورمالدهيد سيجما ألدريتش P6148-1 كجم سكروز سيجما ألدريتش 84097-250 جرام محلول ملحي مخزن بالفوسفات كوزمو بيو هاتف: 16232000 مشرط كاي الطبية رقم 20 ، 520 أ طبق زراعة الخلايا 35 مم صقر 353001 مجهر الطور المقلوب شيمازو 114-909 مشع بالأشعة السينية الفاكسيترون بيوبتيكس فاكسيترون RX-650 طبق ثقافة مربع كورنينج هاتف: 431110 زجاج منزلق ماتسونامي برو -11 كاشف تلطيخ DAPI إشارات الخلية 8961 ثانية المجهر الفلوري نيكون كسوف نيني مرشح DAPI المجهر الفلوري نيكون U-FUW ، BP340-390 ، BA420IF ، DM410 عدسة مجهر مضان (20×) نيكون خطة Apo λ 20X / 0.75 عدسة مجهر مضان (60× ، زيت) نيكون خطة Apo λ 60X / 1.40 زيت نفط أوليمبوس N5218600 كاميرا CCD نيكون DS-Qi2 برنامج الحصول على الصور الرقمية نيكون وثيقة عناصر NIS منظف العدسة أوليمبوس OT0552 كلوروفورم واكو 035-02616

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Cell Death ScreeningDAPI StainingIonizing RadiationClonogenic Cell DeathFluorescence MicroscopyApoptosis DetectionMitotic CatastropheSenescence AnalysisCancer Cell LinesFixation Protocol

Related Articles