استخراج الإكسوسوم القائم على الخرز المغناطيسي: تقنية لعزل إكسوسومات معينة من السوائل الحيوية

الملخص

المصدر: Tu, M. et al. الكشف عن المؤشرات الحيوية الخارجية عن طريق الإطلاق والقياس الناجم عن المجال الكهربائي (EFIRM). J. Vis. Exp. (2015)

في هذا الفيديو ، نوضح إجراء لعزل الإكسوسومات من السوائل الحيوية المستهدفة باستخدام الميكروبيدات المغناطيسية. يتيح الإجراء التقاط سريع للإكسوسومات ، والتي يمكن استخدامها لتحليل المصب.

البروتوكول

فئة < p = "jove_title" >1. استخراج الإكسوسوم القائم على الخرزة المغناطيسية

1. الماصة محلول مختلط جيدا من 5 ميكرولتر من الجسيمات الدقيقة المغناطيسية المطلية بالستربتافيدين في 495 ميكرولتر من محلول ملحي مخزن بالفوسفات (PBS) في أنبوب طرد مركزي دقيق لإعادة تعليق الخرز. اغسل الخرزات وأعد تعليقها ب 500 ميكرولتر من PBS ثلاث مرات باستخدام رف مغناطيسي. الرف عبارة عن مجموعة من المغناطيس على جانب وحدة الإسكان التي يمكنها حمل عينة أنابيب الطرد المركزي الدقيقة.
   1. لكل غسلة ، أولا ، اترك الأنابيب تجلس على الرف لمدة 1 دقيقة ثم استخدم طرف الماصة لإزالة المخزن المؤقت الطافي بعناية دون إزعاج الخرز.
   2. ضع الأنابيب على رف عادي بدون مغناطيس على الجانب. أضف 500 ميكرولت....

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة الاسم الشركة رقم فهرسي التعليقات الأجسام المضادة CD63 المضادة للإنسان المضادة للإنسان Ancell ، الولايات المتحدة الأمريكية 215-030 دينابيدس MyOne ستربتافيدين T1 Invitrogen ، الولايات المتحدة الأمريكية 65601 ريال نيودينيوم مغناطيسيس (1/10 بوصة قطر × 1/32 بوصة سميكة) K&J Magnetics ، الولايات المتحدة الأمريكية درهم 101 ماء مقطر فائق النقاء لايف تكنولوجيز ، الولايات المتحدة الأمريكية 10977-023 مضاد للفلورسين-POD ، شظايا فاب روش ، ألمانيا 11426346910 محلول ملحي مخزن بالفوسفات لايف تكنولوجيز ، الولايات المتحدة الأمريكية 10010023 الكازين / PBS فيشر ساينتفيك ، الولايات المتحدة الأمريكية 37532