تمت مراجعة جميع الإجراءات التي تنطوي على نماذج حيوانية من قبل لجنة رعاية المؤسسية المحلية ومجلس المراجعة البيطرية JoVE.
< ص الفئة = "jove_title" >
1. تشريح الكلى
- تخدير الفئران عن طريق استنشاق 3-4٪ إيزوفلوران في غطاء جيد التهوية. تأكد من تحريض التخدير العميق عن طريق فقدان منعكس قرصة إصبع القدم و / أو الذيل ثم القتل الرحيم للفئران عن طريق خلع عنق الرحم.
- ضع 70٪ إيثانول على الصدر لترطيب الفراء. باستخدام مقص تشريح خارجي ، افتح تجويف البطن عبر شق طولي ، مع شفرات مقص بزاوية بعيدا عن لمنع تلف الأعضاء الداخلية.
- باستخدام ملقط الأنسجة الداخلية ومقص التشريح الداخلي ، اضغط على الأمعاء وارفعها بعيدا عن جدار البطن. أثناء رفع الأمعاء ، قم بقطع الجانب السفلي من الأمعاء من الجسم عند الاثني عشر القريب والقولون البعيد للوصول إلى الفضاء خلف الصفاق الذي يحتوي على الكلى.
- بمجرد تعرض الكلى ، استخرجها بشكل فردي. اضغط برفق على الطرف البعيد من الحالب (~ 4 مم بعيدا عن الكلى) باستخدام ملقط الأنسجة. باستخدام مقص التشريح ، قم بقص أسفل الحالب المضغوط باتجاه الكلى. استمر في القطع تحت الكلية حتى يتم تحريرها من النسيج الضام المحيط.
ملاحظه: لتحقيق أقصى قدر من سلامة الأنسجة واتساق القطع أثناء التقسيم الاهتزازي ، يجب أن تكون الكلية سليمة قدر الإمكان. لضمان ذلك ، تجنب قرص أو قطع الكلى باستخدام الملقط ومقص التشريح.
- ضع الكلية مع الحالب المرفق في محلول KRB مثلج. كرر خطوات الاستخراج مع الكلية المقابلة لإزالتها من جسم الفأر. الحفاظ على الكلى في محلول KRB على الثلج.
ملاحظة: انتقل على الفور إلى القسم التالي من البروتوكول للحفاظ على صلاحية أنسجة PKJ. بسبب موقعه التشريحي في عمق حمة الكلى ، يحرم PKJ من الاتصال بمحلول KRB.
< p class = "jove_title" >
2.
تحضير الكلى بدون كبسولة كلوية لتقطيع الاهتزاز
- انقل الكلية إلى طبق تشريح مغطى بالسيليكون المطاط الصناعي (60 مم × 15 مم) ، واملأها بمحلول KRB المثلج حتى تغمر الكلية بالكامل.
- تحت المجهر التشريح ، قم بتثبيت الكلى على قاعدة الطبق عن طريق إدخال دبابيس دقيقة في الحالب القريب ومن خلال الكبسولة الكلوية الأمامية الرقيقة أو الأنسجة الدهنية المحيطة.
ملاحظه: احرص على عدم ثقب أنسجة حمة الكلى.
- استخدم مقص زنبركي ناعم وملقط داخلي لإزالة الأنسجة الدهنية من قاعدة الكلى لفضح RP البعيد والحالب القريب.
- قم بإزالة الحالب القريب وجزء من RP البعيد من قاعدة RP باستخدام مقص زنبركي ناعم.
ملاحظه: احرص على عدم قطع حمة الكلى المحيطة. يشير الخط الأسود المتقطع في الشكل 1 أ إلى الموضع التقريبي لهذا القطع. يخلق هذا القطع قاعدة مسطحة على الكلى لتقسيم الأنسجة بشكل أكثر اتساقا. عند تشريح الكلى ، يجب على المرء أن يكون على دراية بالوضع التشريحي لمنطقة PKJ. يوضح الشكل 1 ب أنه يمكن قطع الكلية السليمة على طول مستوى سهمي لفضح النخاع ، الحليمة (النخاع البعيد حيث تتلاقى قنوات التجميع) ، و RP القريب والبعيد. إذا تعرضت الحليمة تماما ، كما في الشكل 1C ، فيمكن تصور PKJ و RP القريب (prox RP). ومع ذلك ، لا ينبغي القيام بذلك لتقنية الاهتزاز. هذا الوصف هو توجيه القارئ إلى موقع PKJ بشكل عام ، والذي تم التأكيد عليه في الاختلاف التشريحي الموضح في صور الضوء المرسلة لمنطقة PKJ ومنطقة منتصف RP في الشكل 1D ، E.
- اثقب الكبسولة الكلوية الخارجية بملقط رفيع الرأس ، مع إبعاد الأطراف عن جسم الكلى. باستخدام ملقط مع كل يد ، اضغط على الأطراف السائبة للكبسولة وقشرها عن بعضها. استمر في تقشير غشاء الكبسولة الكلوية المتبقي حتى تتم إزالته بالكامل.
ملاحظه: الكبسولة الكلوية عبارة عن طبقة ليفية صلبة تحيط بالكلى. يجب إزالته قبل تقسيم الاهتزاز للحصول على القطع الأمثل.
