تطعيم الورم المشتق من المريض: تقنية لتوليد نموذج فأر تجريبي لتقييم سرطان الخلايا البولية

الملخص

المصدر: Moret, R. et al. نماذج الطعم الغريب لتقويم العظام المشتقة من المريض لسرطان الخلايا البولية البشرية ونمو ورم سرطان القولون والمستقيم والورم الخبيث التلقائي. J. Vis. Exp. (2019)

يصف هذا الفيديو الإجراء لإنشاء نموذج تجريبي لفئران xenograft ، والذي يمكن استخدامه لدراسة تطور سرطان الخلايا البولية.

البروتوكول

تمت مراجعة جميع الإجراءات التي تنطوي على نماذج حيوانية من قبل لجنة رعاية المؤسسية المحلية ومجلس المراجعة البيطرية JoVE.

1. نموذج ماوس UCC

1. تحضير الفئران للإجراء
   1. احصل على أنثى ماوس NOD / SCID من 6 إلى 8 أسابيع. احلق أسفل ظهر الفأر باستخدام كريم إزالة الشعر. تخدير الفأر في غرفة الحث باستخدام الأيزوفلوران (2.5٪ في 100٪ أكسجين ، 1 لتر / دقيقة).
   2. بمجرد التخدير ، ضع الفأر في وضع ضعيف مع خطمه في مخروط أنف الأيزوفلوران وسرج مؤخر بقوة على قطب كهربائي مشتت.
      ملاحظة: يتم تخدير الماوس تماما إذا كان لا يستجيب لقرص إصبع القدم.
2. خذ الخلايا السرطانية UCC المحصودة وأعد تعليقها في وسائط 50 ميكرولتر RPMI. غرس خلايا UCC في المثانة باستخدام قسطرة وعائية (الشكل 1Aa ، Ab).
   1. قم بإعداد آلة الكي الكهربائي أحادية القطب واضبطها على قوة 4 واط ، قم بتشحيم قسطرة وعائية معقمة 24 جم باستخدام هلام التشحيم وأدخلها من خلال مجرى البول للفأر الأنثوي.
      ملاحظة: قد تشعر بمقاومة طفيفة. ادفع للأمام برفق أو قم بإزالة القسطرة الوعائية وكرر ذلك. لا تجبر. إذا انحنت القسطرة عند الدخول، أدخل سلكا توجيهيا معقما في منتصف الطريق في القسطرة لتوفير الثبات.
   2. أدخل بالكامل سلك التوجيه المستقيم ذو النواة الثابتة مقاس 0.025 بوصة بعد 1 مم بعد نهاية القسطرة الوعائية.
      ملاحظة: يتم تمييز السلك بشريط لاصق قبل الإجراء للإشارة إلى نقطة التوقف 1 مم وضمان الاتساق.
   3. أمسك الدبوس أحادي القطب بالسلك التوجيهي لمدة 1 ثانية ، مما يسمح بتهيج كهربائي للغشاء المخاطي للمثانة.
   4. قم بإرفاق قسطرة وعائية معقمة جديدة بحقنة Luer-Lok سعة 1 سم مكعب وارسم 200 ميكرولتر من الخلايا المجمعة.
      ملاحظة: يتم فقدان 100 ميكرولتر على الأقل من القسطرة الوعائية إلى المحقنة. تعويض حجم الخسارة عند حساب حجم تعليق الخلية المطلوب.
   5. قم بإزالة سلك التوجيه والقسطرة الوعائية من مجرى البول في الفأر. أدخل القسطرة الوعائية مع حقنة من الخلايا المتصلة في مجرى البول.
      ملاحظة: يجب أن يكون التقدم أسهل من ذي قبل.
   6. غرس 50 ميكرولتر من الخلايا في مثانة الفأر. انتظر بضع ثوان قبل إزالة القسطرة الوعائية للسماح للخلايا بالالتصاق بجدار المثانة.
      ملاحظة: تبقى الخلايا في المثانة وتتطور إلى ورم أولي.

النتائج

p class = "jove_content" fo: keep-together.within-page = "1" >
الشكل 1: نماذج الماوس UCC تقويم العظام. (أ) تم إدخال قسطرة وعائية في مثانة أنثى فأر NOD / SCID وتم تطبيق صدمة الكي الكهربائي على جدار المثانة عبر سلك توجيهي. (أب) تم غرس خلايا ورم UCC الموسومة ب Luciferase ، BlCaPt15 (2 × 10⁴ خلايا) ، أو BlCaPt37 (5 × 10^{5 خلايا}) مع إضافة 3 × 10⁵ LN خلايا HK اللحمية ، في مثانة الفأر NOD / SC...

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة الاسم الشركة رقم فهرسي التعليقات كريم إزالة الشعر شركة تشيرش آند دوايت 1 (800) 248-8820 إيزوفلوران هنري شاين لصحة 108333 6-8 أسابيع من الفئران NOD / SCID (أنثى) جاكسون لاب 1303 ملقط شركة التماثل الجراحية 06-0011 مولد الجراحة الكهربائية فالي لاب FORCE1C20 غرفة تحريض الأيزوفلوران بيركين إلمر 119038