مقالة منهجية

تحضير كلية الفئران منزوعة الخلايا: إجراء لتوليد سقالة الأوعية الدموية الكاملة من كلية الفئران المحصودة

فبراير 22, 2023

في هذه المقالة

الملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

المصدر: Kim، E. H. et al. تحضير سقالات الكلى منزوعة الخلايا في الفئران. J. Vis. Exp. (2021)

يصف هذا الفيديو تحضير كلية فئران منزوعة الخلايا. يمكن أن تكون سقالة الأوعية الدموية اللاخلوية التي تم الحصول عليها بمثابة منصة واعدة لهندسة الأنسجة لترقيع الأعضاء.

البروتوكول

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

تمت مراجعة جميع الإجراءات التي تنطوي على نماذج حيوانية من قبل لجنة رعاية المؤسسية المحلية ومجلس المراجعة البيطرية JoVE.

< p class = "jove_title" >1. حصاد الكلى وإزالة الخلايا

  1. حصاد الكلية اليسرى مع الشريان الأورطي البطني والوريد الأجوف السفلي.
  2. ربط الحالب والشريان الأورطي الصدري والوريد الأجوف العلوي وفروع الشريان الأورطي البطني.
  3. حافظ على ترطيب العضو في برنامج Dulbecco PBS (DPBS) في طبق بتري مقاس 10 سم.
  4. قنية الشريان الأورطي البطني والوريد الأجوف السفلي باستخدام قسطرة 23G. لإزالة الدم المتبقي ، قم بتوصيل القنية بمضخة تمعجية واغسلها باستخدام DPBS (500 مل) و 16 وحدة / مل من الهيبارين لمدة 90 دقيقة بمعدل 5 دورة في الدقيقة عند 37 درجة مئوية.
  5. لإزالة الخلايا من الكلى ، قم بدمج الكلى بنسبة 1٪ Triton X-100 (1 لتر) لمدة 3 ساعات ثم بمحلول 0.75٪ كبريتات دوديسيل الصوديوم (SDS) (2 لتر) لمدة 6 ساعات عند ضغط ثابت 40 مم زئبق><. ملاحظه: ستصبح الكلية شفافة بعد 8 ساعات.
  6. لإزالة SDS المتبقي ، قم بنقف العينة ب 1٪ بنسلين في الماء المقطر (6 لتر) لمدة 18 ساعة (بين عشية وضحاها) ثم باستخدام DPBS معقم (500 مل) و 16 وحدة / مل من الهيبارين لمدة 90 دقيقة.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
لم يتم الإعلان عن أي تضارب في المصالح.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة الاسم الشركة رقم فهرسي التعليقات أنابيب بوليثيلين 50 ، أنابيب قسطرة 100 قدم برينتري العلمية .023 بوصة × .038 بوصة 3-0 بكرة الحرير الوصول إلى الأوعية الدموية / ربط في الفئران برينتري العلمية SUT-S 110 مقص ناعم لقطع اللفافة / النسيج الضام أدوات العلوم الدقيقة 14058-09 إبرة توجيه قياس 25 بوصة (لقسطرة الأوعية الدموية) بيكتون ديكنسون 305145 شوارتز microserrefine المشابك الوعائية أدوات العلوم الدقيقة 18052-01 (مستقيم) 5-0 بكرة الحرير الوصول إلى الأوعية الدموية / ربط في الماوس برينتري العلمية SUT-S 106

إعادة الطباعة والأذونات

طلب إذن لإعادة استخدام النص أو الأشكال في مقالة JoVE هذه

طلب إذن

الوسوم

Triton X 100 SDS PBS

مقالات ذات صلة