مقالة منهجية

نمذجة ورم المثانة التقويمي في نموذج الفأر: إجراء للإعطاء داخل المثانة للخلايا السرطانية في مثانة الفئران

أبريل 30, 2023

في هذه المقالة

الملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

المصدر: Tham، S. M. et al. نموذج ورم تقويم المثانة الفئران ونظام الكشف عن الورم.J. Vis. Exp.(2017)

في هذا الفيديو ، نصف الإجراء داخل المثانة لتوصيل الخلايا السرطانية إلى مثانة نموذج الفأر. يساعد هذا الإجراء في إنشاء نموذج ورم المثانة التقويمي الذي يمكن استخدامه لتطوير استراتيجيات علاجية.

البروتوكول

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

تمت مراجعة جميع الإجراءات التي تنطوي على نماذج حيوانية من قبل لجنة رعاية المؤسسية المحلية ومجلس المراجعة البيطرية JoVE.

< p class = "jove_title" >1. زرع الورم

ملاحظة: يتم زرع كل فأرة بخلايا 1 × 105 MB49-PSA في 50 ميكرولتر من وسائط DMEM الفارغة في المثانة. نظرا للمساحة الميتة في القسطرة ، قم دائما بإعداد حجم إضافي (100 ميكرولتر إضافي على الأقل لكل فأر). وهناك نهج بديل يتمثل في استخدام حقنة مملوءة بالهواء.

  1. خلايا
    1. قبل يوم واحد من الزرع ، عندما تكون الخلايا ملتقية بنسبة 80٪ تقريبا ، تمر الخلايا السرطانية MB49-PSA في وسائط DMEM كاملة (مكملة بنسبة 10٪ FBS ، و 2 مليمول / لتر L-glutamine ، و 0.05 مجم / مل بنسلين ستربتومايسين ، و 200 ميكروغرام / مل Hygromycin B) عند 37 درجة مئوية و 5٪ ثاني أكسيد الكربون2 بنسبة انقسام 1: 2.
    2. في يوم الإجراء ، قم بحصاد الخلايا عن طريق كشطها برفق باستخدام مكشطة خلية معقمة. امزج كميات متساوية من تعليق الخلية ومحلول تريبان أزرق بنسبة 0.4٪. عد الخلايا الحية باستخدام مقياس كثافة الدم. لا تزرع إذا كانت أكثر من 20٪ من الخلايا ميتة.
    3. احسب عدد الخلايا الحية المطلوبة (2 × 106 خلايا / مل) وانقلها إلى أنبوب طرد مركزي سعة 15 مل. جهاز طرد مركزي عند 250 × جم لمدة 5 دقائق عند 4 درجات مئوية وتخلص من المادة الطافية. أعد تعليق حبيبات الخلية في وسائط DMEM الفارغة. كرر الغسيل ثلاث مرات لإزالة جميع آثار FBS قبل الزرع.
    4. احتفظ بتعليق الخلية على الجليد حتى تصبح الفئران جاهزة للزرع.
  2. اسمح للفئران الأنثوية C57BL / 6J البالغة من العمر 4 إلى 6 أسابيع بالتأقلم لمدة أسبوع واحد قبل الإجراء. يجب تنفيذ جميع الأعمال الحيوانية في خزانة سلامة بيولوجية للحفاظ على ظروف معقمة.
    1. وزن كل فأر وحقن التخدير (75 ملغ/كغ من الكيتامين و1 ملغم/كغ ميديتوميدين) داخل الصفاق بمعدل 0.1 مل لكل 10 جم من وزن الجسم. يجب أن يتراوح وزن الجسم بين 17 و 22 جم. تأكد من التخدير من خلال ملاحظة عدم الاستجابة بعد قرصة إصبع القدم.
    2. لتحديد الهوية ، ضع علامة على الأذن باستخدام لكمة الأذن.
    3. حقن محلول هارتمان أو مركب لاكتات الصوديوم داخل الصفاق بمعدل 0.1 مل لكل 10 جم من وزن الجسم كل 1-2 ساعة للترطيب.
    4. ضع مرهما معقما للعيون على كلتا العينين باستخدام بصلة قطنية معقمة ، حيث يفقد المنعكس الوامض تحت التخدير وتجف العينين. أعد وضعه عند الضرورة.
    5. ضع الفئران في وضع ضعيف على مناشف ورقية فوق كمادة حرارية (يتم تنشيطها عن طريق ملامسة الهواء) للحفاظ على درجة حرارة الجسم ولصق الأرجل الخلفية لأسفل.
  3. باستخدام إصبع ، اضغط برفق على منطقة أسفل البطن واجمع البول من المثانة إلى أنبوب طرد مركزي دقيق سعة 1.5 مل. هذه العينة بمثابة القيمة الأساسية لمستضد البروستاتا النوعي البولي.
  4. اسحب بولي إل-ليسين معقم (PLL) في حقنة سعة 1 مل وقم بإرفاق قسطرة وريدية عيار 24 ، مع إزالة نمط الإبرة. ضع مادة التشحيم على طرف القسطرة وأدخل القسطرة عبر مجرى البول في المثانة باستخدام ملقط لتوجيه القسطرة. توقف عندما تشعر بالمقاومة.
    ملاحظة: يجب على الباحثين مناقشة مع طاقمهم البيطري حول الحاجة إلى استخدام جل التشحيم مع التخدير للتقطير داخل المثانة واستخدام المسكنات بعد العملية.
  5. غرس 50 ميكرولتر من PLL ببطء ، بمعدل 10 ميكرولتر كل 20 ثانية ، لتجنب الارتجاع المثاني الحالبي. اترك القسطرة في المثانة لمدة 20 دقيقة باستخدام سدادة لمنع التدفق للخارج.
  6. بعد 20 دقيقة ، قم بإزالة القسطرة وإخلاء المثانة من أي محتويات بالضغط برفق على منطقة أسفل البطن. باستخدام حقنة فارغة سعة 1 مل ، قم بإخراج أي محتويات متبقية من القسطرة.
  7. امزج خلايا MB49-PSA جيدا عن طريق سحب العينات وسحبها في حقنة سعة 1 مل. قم بتوصيل القسطرة وتطبيق مواد التشحيم. غرس 50 ميكرولتر من 1 × 105 خلايا بمعدل بطيء يبلغ 10 ميكرولتر كل 20 ثانية. استبدل السدادة الموجودة على القسطرة. أعط الفئران الضابطة 50 ميكرولتر من المحلول الملحي.
  8. بعد 1 ساعة ، قم بإزالة القسطرة وإخلاء المثانة من أي محتويات. قم بإزالة الشريط اللاصق الموجود على الأرجل الخلفية وضع الفئران على جانبيها البطني. قم بإحياء الفئران عن طريق حقن الدواء العكسي تحت الجلد (1 مجم / كجم من الأتيباميزول) بمعدل 0.1 مل لكل 10 جم من وزن الجسم.
  9. راقب الفئران حتى يتم ملاحظة الحركة. أعد الفئران إلى أقفاصها.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
لم يتم الإعلان عن أي تضارب في المصالح.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة الاسم الشركة رقم فهرسي التعليقات خلايا MB49-PSA المرجع (وو كيو إتش ، 2004) Dulbecco's Modified Eagle
وسائط متوسطة (DMEM) الغرب الحيوي L0102 مصل الأبقار الجنينية (FBS) أمريكا الجنوبية الغرب الحيوي S1810 مصل الأبقار الجنينية (FBS) أمريكا الجنوبية ، بريميوم الغرب الحيوي S181 ب مصل الأبقار الجنينية (FBS) HyClone SH30088.03 L-الجلوتامين Biowest X0550 الغرب الحيوي إكس 0550 البنسلين - ستربتومايسين الغرب الحيوي L0022 هيغروميسين ب إنفيتروجين هاتف: 10687-010 C57BL / 6J إناث الفئران في فيفوس 4-6 أسابيع قديمة التخدير (75 ملغ/كغ كيتامين و1 ملغم/كغ ميديتوميدين) صيدلية محلية المخدرات العكسية (1 ملغ/كغ أتيباميزول) صيدلية محلية لكمة الأذن علوم المجهر الإلكتروني 72893-01 محلول هارتمان أو مركب لاكتات الصوديوم بي براون مرهم العيون - مرهم زيوت التشحيم العينية المعقم Duratears الكون حزمة الحرارة - تدفئة اليدين HotHands شركة هيتماكس قسطرة Introcan Certo IV بي براون هاتف: 4251300 24 جم × 3/4 بوصة Aquagel تشحيم جيلي صيدلية محلية محلول بولي إل ليسين ، 0.01٪ سيغما ص 4707

إعادة الطباعة والأذونات

طلب إذن لإعادة استخدام النص أو الأشكال في مقالة JoVE هذه

طلب إذن

الوسوم

PLL Hartmann

مقالات ذات صلة