مقالة منهجية

تغليف siRNA في الإكسوسومات باستخدام التثقيب الكهربائي: تقنية تعتمد على النبض الكهربائي لتحميل siRNA في الإكسوسومات

أبريل 30, 2023

في هذه المقالة

الملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

المصدر: Faruqu, F. N. et al. تحضير الإكسوسومات لتوصيل siRNA إلى الخلايا السرطانية. J. Vis. Exp. (2018)

يصف هذا الفيديو طريقة قائمة على التثقيب الكهربائي لتغليف siRNA في الإكسوسومات. يمكن بعد ذلك استخدام الإكسوسومات المحملة بالحمض النووي الريبي للتطبيقات العلاجية.

البروتوكول

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
< p class = "jove_title" >1. تغليف siRNA في Exosomes عن طريق التثقيب الكهربائي

    قم
  1. بتبريد كوفيت التثقيب الكهربائي مسبقا (انظر جدول المواد) على الجليد لمدة 30 دقيقة قبل التثقيب الكهربائي.
  2. امزج 7.0 ميكروغرام من الإكسوسومات (32 ميكرولتر من 7 × 1012 بكسل / مل في PBS) مع 0.33 ميكروغرام من siRNA (12 ميكروغرام من مخزون 2 ميكرومتر في ماء خال من RNase) في أنبوب الطرد المركزي الدقيق. اصنع الحجم حتى 150 ميكرولتر باستخدام عازلة حامض الستريك (انظر جدول المواد). النسبة المولية للإكسوسوم إلى الحمض النووي الريبي هي 1:60 في هذه الحالة.
  3. انقل الخليط إلى كوفيت التثقيب الكهربائي. قم بتغطية الكوفيت وضعه في حامل الكوفيت الخاص بالمثقب الكهربائي (انظر جدول المواد). قم بتدوير عجلة الدوران 180 درجة في اتجاه عقارب الساعة.
    ملاحظه: يجب تشغيل العجلة بالكامل إلى وضع القفل ، حتى تتصل الكوفيت بالأقطاب الكهربائية.
  4. حدد برنامج التثقيب الكهربائي المطلوب (على سبيل المثال ، X-01 ، X-05 ، A-20 ، T-20 ، T-30 ، إلخ) وابدأ التثقيب الكهربائي بالضغط على زر البدء.
    ملاحظه: يشار إلى النبض الناجح من خلال إظهار "موافق" على الشاشة.
  5. بمجرد تثقيلها بالكهرباء ، قم بإزالة الكوفيت بعد إعادة العجلة للخلف 180 درجة عكس اتجاه عقارب الساعة. اسحب العينة من الكوفيت باستخدام الماصة البلاستيكية لمزيد من المعالجة.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
لم يتم الإعلان عن أي تضارب في المصالح.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة الاسم الشركة رقم فهرسي التعليقات Atto655-siRNA يوروجينتيك إس كيو سيرنا (المسمى - S) UGC-GCU-ACGAUC-GAC-GAU-G55 ؛ (غير مسمى AS) CAU-CGU-CGA-UCG-UAGCGC-A55. الماصات الزجاجية فيشر ساينتيك 1156-6963 Amaxa Nucleofector I لونزا النوكليوفكتور الأول مع مجموعات Nucleofector من Amaxa عازلة حامض الستريك مع EDTA امزج 0.1954 جم من حامض الستريك و 0.2087 جم فوسفات ثنائي الصوديوم في 50 مل من الماء منزوع الأيونات. أضف EDTA إلى 0.1 ملم. اضبط الرقم الهيدروجيني على 4.4. أنابيب الطرد الدقيق ستارلاب S1615-5500 1.5 مل

إعادة الطباعة والأذونات

طلب إذن لإعادة استخدام النص أو الأشكال في مقالة JoVE هذه

طلب إذن

الوسوم

interfering siRNA siRNA

مقالات ذات صلة