$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
< ص الفئة = "jove_title" >
1. زرع الخلايا
لزرع خلايا Renca داخل الكلى ، قم بإعداد خلايا Renca في معلق أحادي الخلية عند 2 × 106 خلايا / مل في محلول الملح المتوازن من هانك (HBSS).
- قم بإزالة خلايا Renca الملتصقة من قارورة زراعة الأنسجة باستخدام 0.25٪ تربسين في HBSS. بعد ~ 5 دقائق ، أضف RPMI كاملا إلى القارورة لتحييد التربسين ونقل الخلايا إلى أنبوب الطرد المركزي للغسيل. الطرد المركزي للخلايا عند 300 قوة طرد مركزي نسبية (RCF x g) لمدة 5 دقائق عند 25 درجة مئوية.
- صب المادة الطافية وإعادة تعليق الخلايا في HBSS. عد الخلايا باستخدام مقياس كثافة الدم واضبط مستوى الصوت باستخدام HBSS لإنتاج 2 × 106 خلايا / مل.
- اسحب الخلايا إلى حقنة سعة 1 مل مزودة بإبرة قياس 18 لمنع إجهاد القص على الخلايا. استبدل الإبرة قياس 18 بإبرة قياس 28 قبل حقن الخلايا السرطانية. حقن 0.1 مل ينقل 2 × 105 خلايا في الكلى.
فئة < ص = "jove_title" >
2. إعداد المنطقة الجراحية
- قم بإعداد منطقة جراحية معقمة في خزانة السلامة الحيوية عن طريق وضع ستارة جراحية معقمة فوق وسادة تدفئة. اجمع جميع المستلزمات ، بما في ذلك الملقط والمشرط والمقص وقطرات العين ومطهر بوفيدون اليود بنسبة 5٪ وشاش معقم. الأوتوكلاف جميع الأدوات قبل الاستخدام.
- قم بإجراء الجراحة باستخدام تقنية الطرف المعقم. أعد تعقيم الأدوات بين باستخدام معقم الخرز. ارتد قفازات معقمة ومعطف مختبر وقناع للوجه.
< ص الفئة = "jove_title" >
3. تحضير
- تخدير الفئران بالكيتامين / الزيلازين (87.5 مجم / كجم و 12.5 مجم / كجم ، على التوالي ، IP) وفقا للإرشادات المؤسسية. تحديد عمق التخدير عن طريق إجراء قرصة إصبع القدم.
- عندما يعتبر غير مستجيب ، قم بإعداد موقع الحقن (على سبيل المثال ، الجناح الأيسر) على فئران Balb / c عن طريق نتف الفراء (بالأصابع) أو الحلاقة (باستخدام المقص).
- انقل الفئران من منطقة التحضير للجراحة (على سبيل المثال ، قفص السكن) إلى منطقة الجراحة وقم بتطبيق مرهم بيطري على العينين لمنع الجفاف. امسح موقع الشق المحضر بكمية وفيرة بمطهر بوفيدون يود بنسبة 5٪.
- حقن بوبيفاكائين هيدروكلوريد (0.1 مل من محلول 2.5 مجم / مل ، s.c) في المنطقة التي سيتم فيها إجراء الشق كمسكن قبل الجراحة.
- قم بعمل شق واحد (~ 1.0 إلى 1.5 سم) على الجانب الأيسر للحيوان باستخدام مشرط أو مقص معقم بعناية حتى لا تخترق الصفاق. افصل الأدمة عن الصفاق بمقص معقم. ربت على موقع الشق بشاش قطني معقم لإزالة أي دم.
- أمسك الماوس بكلتا يديك ، باستخدام اليد اليسرى لإمساك الرأس واليد اليمنى لدعم الجناح.
- حدد الطحال من خلال الصفاق ، وباستخدام إصبع واحد من اليد اليمنى ، قم بجس الفأر من الأسفل ؛ يجب أن تكون الكلية مرئية الآن من خلال الصفاق. حافظ على قبضة قوية على لتوفير التوتر عبر الصفاق والكلى.
- اطلب من شخص ثان حقن الخلايا السرطانية (المحضرة في القسم 1.2) من خلال الصفاق السليم في وسط الكلى باستخدام حقنة سعة 1 مل مزودة بإبرة قياس 28. قم بتوصيل 0.1 مل (2 × 105) من الخلايا ببطء. بمجرد حقن الخلايا ، أمسك الإبرة في مكانها لمدة 5-10 ثوان لتقليل التدفق العكسي للخلايا. من المهم ملاحظة الحاجة إلى توخي الحذر الشديد خلال هذه الخطوة ، حيث أن الشخص الذي يحقن الخلايا سيجعل الإبرة على مقربة من أصابع الشخص الذي يمسك بالفأر.
- قم بإزالة الإبرة وأغلق الشق بطبقة رقيقة من لاصق الأنسجة السيانواكريليت.
- ضع مرة أخرى في قفص نظيف بمنشفة ورقية معقمة. اسمح للحيوانات بالتعافي على وسادة التدفئة. لا تترك دون رقابة خلال فترة التعافي. لا تعيد إلى ظروف السكن القياسية حتى تصبح منتصبة وقصيرة. اتبع الإرشادات المؤسسية في جميع الإجراءات باستخدام المختبر.