$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
تمت مراجعة جميع الإجراءات التي تنطوي على نماذج حيوانية من قبل لجنة رعاية المؤسسية المحلية ومجلس المراجعة البيطرية JoVE.
1. إعداد مراكز مكافحة الإرهاب
- احسب عدد الخلايا الملحقية اللازمة للحقن وقم بإعداد معلق أحادي الخلية عند 1.0 × 104 خلايا / ميكرولتر في محلول ملحي معقم مخزن بالفوسفات (PBS). ضع معلق الخلية على الجليد أو عند 4 درجات مئوية طوال العملية.
ملاحظه: عند استخدام خطوط الخلايا التي تتطلب التربسين ، تأكد من غسل الخلايا مرتين باستخدام PBS معقم لإزالة التربسين. قم بإجراء تعداد الخلايا باستخدام مقياس كثافة الدم أو عداد الخلايا الآلي. إذا تم استخدام مجموعة كبيرة (>50 فأرا) ، فأعد عد الخلايا وتحقق من صلاحية الخلية بين الحقن لضمان إعطاء عدد ثابت من الخلايا لكل فأر.
< p class = "jove_title" >
2. إجراء ما قبل الجراحة
- حقن الفأر تحت الجلد ب 5 ملغم/كغ من البوبرينورفين المستمر المفعول (Bup-SR).
ملاحظه: لا تحقن منطقة الشق المقترح ؛ اختيار موقع حقن بعيدا عن لوح الكتف.
- قم بتخدير الفأر بنسبة 2-3٪ من الأيزوفلوران حتى لا تظهر عليه أي علامات على المنعكس الصحيح. بالإضافة إلى ذلك ، تحقق من رد فعل قرصة الذيل و / أو المخلب لتأكيد حالة التخدير.
- جهز الفأر للجراحة في مكان بعيد عن منطقة العمليات. قص موقع الجراحة (أي السطح الظهري للجمجمة) بمساحة حدودية كافية لمنع الفراء من تلويث موقع الشق ؛ بعد ذلك ، قم بتشبع الموقع بمطهر للجلد المبيد للجراثيم ، واعمل من وسط الموقع إلى المحيط ، ثم اتركه حتى يجف. ضع إما ستارة معقمة أو مادة ستارة بلاستيكية معقمة مدعومة بمادة لاصقة لحماية موقع الجراحة من التلوث.
ملاحظه: يجب تعقيم الأدوات مسبقا وإعادة تعقيم الأطراف بين باستخدام معقم الخرز الزجاجي.
- احلق فرو السطح البطني بالكامل للرأس وقم بإعداد الجلد باستخدام تقنية المعقمة.
- ضع الأنف بمخروط أنف معدل على شكل حرف L للجهاز التجسيمي ، مما يضمن بقاء الأنف صافيا ومفتوحا. باستخدام شريط لاصق عبر الأسطح البطنية لكلا الصيوان ، اسحب الجلد برفق للأمام لتثبيته على مخروط الأنف وثني الرقبة بزاوية 90 درجة تقريبا بمجرد تثبيتها. تطبيق 1.5٪ إيزوفلوران للحفاظ على التخدير.
ملاحظه: سيؤدي الوضع الصحيح إلى تقديم منطقة الشق بطريقة تسمح بالتعرف السهل على التلال الذيلية للعظم القذالي.
- ضع الجسم للتأكد من أن العمود الفقري مستوي مع صهريج الصهريج ، وأثناء تطبيق الجر الطفيف على الذيل ، ضع شريطا في قاعدة الذيل لتثبيته.
فئة
3. حقن الصهريج الجراحي ماجنا
- مع تمديد الرقبة بالكامل ، والبدء بين الصيوان مباشرة ، قم بتشغيل أطراف المقص الجراحي لأسفل بضغط طفيف عبر العظم القذالي.
ملاحظه: أثناء التواجد في وضع خط الوسط هذا ، يكون هناك اكتئاب صغير ملحوظ عندما تنخفض أطراف المقص في المنطقة المقعرة فوق صهريج ماجنا.
- قم بعمل شق صغير في خط الوسط من 3 إلى 5 مم فوق التقعر الملمس مباشرة. ارسم 5 ميكرولتر من تعليق الخلية عند 1.0 × 104 خلايا / ميكرولتر (إجمالي 5.0 × 104 خلايا) في حقنة هاميلتون 30 جم.
- استخدم ملقطا غير حاد بأطراف من 1 إلى 2 مم للضغط برفق على صهريج ماجنا. أدخل النصائح في وضع مغلق وافتحها أثناء الضغط الهبوطي على الجافية.
- كرر التشريح الحاد الموصوف في الخطوة السابقة حتى يتم التعرف على الغشاء الجافوي بسهولة ، وتظهر الأوعية الدموية المرتبطة بها في المنطقة المكشوفة.
ملاحظه: تضمن نافذة الحقن الناتجة عدم تلف الأوعية الدموية أثناء إدخال الإبرة.
- أثناء فتح الملقط لسحب العضلات المحيطة ، أدخل إبرة 30 جم غير محفورة أسفل الجافية لتصور الشطبة. تأكد من إدخال الإبرة فقط خارج الشطبة نفسها. انشر مكبس الحقنة ببطء وقم بتوصيل الخلايا أسفل الجافية مباشرة.
- ضع الشطبة بشكل صحيح لمراقبة الحقن أسفل الجافية. قم بإدارة التقنية بعناية واستخدم الإبرة غير المحفورة 30 جم لمنع تلف الغشاء وضمان الحد الأدنى من التسرب. إذا لوحظ تسرب ، فاضغط برفق باستخدام قضيب قطني.
- أغلق الجلد عن طريق وضع مشبك الجرح أو قطرة صغيرة من لاصق الجلد. بمجرد إجراء الحقن بنجاح ، اسمح للفئران بالتعافي من التخدير على بطانية دافئة ، وراقبها باستمرار حتى تتمكن من الحفاظ على الوضع القصي وإظهار حركة هادفة.
- راقب الفئران يوميا بعد الجراحة في الأسبوع الأول. إذا بدا أن الفأر يعاني من الألم أو الضيق ، فقم بعلاجه بحقن 10 مجم / كجم تحت الجلد من الكاربروفين مرة كل 12 إلى 24 ساعة لمدة تصل إلى 5 أيام بناء على الاستشارة البيطرية والتوجيهات. اسمح للفئران بالتعافي ومراقبتها لمدة 48 إلى 72 ساعة على الأقل قبل الانتقال إلى الخطوة التالية.
ملاحظه: سيستمر Bup-SR ، الذي يتم إعطاؤه بشكل استباقي ، لمدة تصل إلى 72 ساعة ، لذلك لا تكون المسكنات الإضافية ضرورية عادة. ومع ذلك ، سيتم تزويد بمسكنات إضافية حسب الضرورة (إذا كانت خاملة ، ولا تأكل ، مكشكشة). إذا ظهرت على موقع الجراحة علامات عدوى ما بعد الجراحة (مثل احمرار أو تورم أو إيلام أو تألم أو تألم أو فرط الألم أو فرط الاعتلال أو التقيح) ، أو إذا كان الفأر يحرس المنطقة المصابة ، فقم بالقتل الرحيم للفأر. إذا تم حقن الخلايا السرطانية بنجاح في السائل الدماغي النخاعي ، فسوف يتطور LMD وتطور الورم في الجهاز العصبي المركزي في غضون أسبوع أو أسبوعين (اعتمادا على أنواع الخلايا السرطانية أو خط الخلايا المستخدم) (الشكل 1).
