الحقن داخل المخ البطيني في الفأر: طريقة إدارة الأدوية المباشرة بوساطة أومايا لتوصيل الأدوية إلى البطينين الدماغيين في دماغ الفأر

الملخص

< p class = "jove_content" >المصدر: Law ، V. et al. نموذج Xenograft للفأر Ommaya لدراسة العلاج الموجه المباشر لمرض البريميات السحائية. J. Vis. Exp. (2021)

يوضح هذا الفيديو الحقن داخل البطيني بوساطة ommaya في نموذج الفأر. تتيح هذه الطريقة التسليم الموضعي للأدوية المرشحة المحتملة وتتهرب من الحاجز الدموي الدماغي.

البروتوكول

تمت مراجعة جميع الإجراءات التي تنطوي على نماذج حيوانية من قبل لجنة رعاية المؤسسية المحلية ومجلس المراجعة البيطرية JoVE.

< ص الفئة = "jove_title" >1. الفئران أومايا التجمع والزرع

1. إعداد المحطة
   1. تطهير سطح المحطة. ضع غطاءا أزرق على السطح واحتفظ بجميع الأدوات والمستلزمات المعقمة الموضحة في الشكل 1 جاهزة.
2. إجراء ما قبل الجراحة
   1. تطبيق التسكين (Bup-SR) والحفاظ على بيئة جراحية معقمة.
3. الزرع الجراحي للفئران أومايا
   1. قم بتجميع جهاز حقن Murine Ommaya باستخدام منفذ حقن مصغر 25G (قطر خارجي 0.51 مم) وقرص فاصل 1 مم. استخدم مادة لاصقة معقمة cyanoacrylate لضمان تغلغل ما يقرب من 2.5 مم من القنية المعدنية في نصف الكرة الدماغي الأيمن (الشكل 2A-C).
      ملاحظه: تم تطوير نموذج أولي متوافق مع التصوير بالرنين المغناطيسي Mouse Ommaya في هذا المختبر ، والذي يحتوي بالفعل على كلا الجزأين (منفذ الحقن المصغر والفاصل) مطبوع ثلاثي الأبعاد معا كوحدة واحدة (الشكل 2 د). تم اختبار إصدار الوحدة الواحدة بواسطة التصوير بالرنين المغناطيسي ويمكنه توفير الوقت عن طريق التخلص من خطوة التجميع.
   2. قم بتخدير الفأر باستخدام 2-3٪ من الأيزوفلوران حتى لا تظهر علامات على المنعكس الصحيح. علاوة على ذلك ، تحقق من رد فعل قرصة الذيل و / أو المخلب لتأكيد حالة التخدير.
   3. حلق السطح البطني بالكامل لرأس الفراء وإعداد الجلد وفقا للتقنية المعقمة. وضع الفأر في الجهاز التجسيمي مع مخروط الأنف لمواصلة إعطاء الأيزوفلوران أثناء الإجراء; خفض الأيزوفلوران إلى 1.5٪. شد قضبان الأذن برفق لتأمين الرأس ووضع مواد تشحيم العين لتغطية عيني الفأر.
   4. قم بعمل شق صغير في الجلد (3 مم) ، متبوعا بتشريح حاد للأنسجة تحت الجلد لكشف الجمجمة. جفف الجمجمة باستخدام أعواد قضيب قطنية مبللة ببيروكسيد الهيدروجين.
   5. قم بحفر ثقب لدغ في الجمجمة 0.5 مم خلف و 1.1 مم جانبيا من البريما - النقطة التشريحية على الجمجمة حيث تتقاطع الخيط الإكليلي بشكل عمودي بواسطة الخيط السهمي (الشكل 2 أ) ، بالإضافة إلى ثقب لدغ 0.9 مم لفضح الأم الجافية. حرك المثقاب المجهر جانبا ، وقم بتقطيع العظم المحيط مباشرة بفتحة الأزيز قبل إدخال منفذ الحقن (عمق 2.5 مم تقريبا) ، مثبت على الجمجمة باستخدام مادة لاصقة معقمة cyanoacrylate. ضع خياطة حول بقعة الحقن باستخدام 4-0 خيوط نايلون غير قابلة للامتصاص في نمط غرزة متقطعة أو خياطة خيط محفظة.
   6. منزل الفئران بعد الجراحة في أقفاص فردية للتعافي من الجراحة.
      ملاحظه: من الممكن أن تؤتي ثمارها الفئران عندما يتم وضع العديد من الفئران التي تم تعافتها من الجراحة في نفس القفص ، ربما بسبب تفاعلات العبث المستمرة. يوصى بإيواء الفئران المزروعة في Murine Ommaya بشكل فردي (أو ما لا يزيد عن 2 فأر لكل قفص) على مدار تجربة فعالية الدواء.

< ص الفئة = "jove_title" >2. علاج الفئران أومايا

1. جرعات الفئران باستخدام Murine Ommaya
   1. قم بتخدير الفأر باستخدام 2-3٪ من الأيزوفلوران ، حتى لا تظهر علامات على تصحيح المنعك. علاوة على ذلك ، تحقق من رد فعل قرصة الذيل و / أو المخلب لتأكيد الحفاظ على التخدير.
   2. قم بالوصول إلى Murine Ommaya باستخدام محول حقن المنفذ وحقنة هاميلتون. باستخدام الملقط ، أمسك الجزء العلوي من منفذ الحقن المصغر وأدخل محول حاقن المنفذ برفق بالكامل في حاجز المنفذ.
      ملاحظه: يخترق حاقن المنفذ حاجز المنفذ بطريقة تقلل المساحة الميتة إلى الحد الأدنى وتسمح بالحقن المتحكم فيه عبر مضخة حقنة آلية (الشكل 3 أ). يتم حقن العلاجات المستهدفة / الجديدة بمعدل تدفق 1 ميكرولتر / دقيقة أثناء التخدير. يجب إعطاء العلاج على فترات محددة (يوميا / أسبوعيا) لمدة محددة (أسابيع / أشهر) ، وفقا لتقدير الباحث.
      الحجم بين 3 و 7 ميكرولتر هو الأمثل ، حيث أن الحجم <3 ميكرولتر غير موثوق به ، وقد يتسبب الحجم >7 ميكرولتر في ضغط كبير جدا. يمكن أن يتراوح حجم حقنة هاميلتون من 10 إلى 100 ميكرولتر ، اعتمادا على عدد الفئران في كل ذراع علاج. سيؤدي التحميل المسبق للحجم المناسب في حقنة هاميلتون إلى منع الاستبدال المتكرر للحقنة ، وبالتالي تقليل الأخطاء. من الأفضل تخصيص 1 حقنة هاميلتون لكل ذراع علاج.
   3. بمجرد إجراء الحقن ، افصل Murine Ommaya عن محول حقن المنفذ باستخدام الملقط ، وأعد الفأر إلى القفص للتعافي من التخدير.

النتائج

الشكل 1: مثال على إعداد محطة عمل لإجراء زرع Murine Ommaya في الفئران. (1) آلة تخدير الغاز / المرذاذ. (2) ستارة ورقية زرقاء معقمة تغطي حاملا تجسيميا. (3) جهاز تجسيمي (حامل / مرحلة ، قضبان أذن ، مخروط أنف). (4) الحفر الصغير. (5) عدسة مكبرة بالضوء. (6) عصي قضيب معقمة ذات رؤوس قطنية مع حاوية شطف ملحية معقمة. (7) بيروكسيد الهيدروجين. (8) معقم الخرز.

الشكل 2: زرع جهاز Murine...

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة الاسم الشركة رقم فهرسي التعليقات قرص فاصل 1 مم ألزيت ، شركة دوريت #0008670 قرص فاصل فقط 4-0 خياطة نايلون إيثيلون أي بائع مضخات الحقنة الأوتوماتيكية مضخات حقن هارفارد (أو أي بائع) # 70-4505 مضخة 11 إيليت معقم الخرز شركة Braintree Scientific Inc. (أو أي بائع) #GER 5287-120 فولت نبات 500 بوبرينورفين مستدام الإطلاق (Bup-SR) زوفارم تسيطر عليها إدارة مكافحة المخدرات لاصق معقم سيانواكريليت أي بائع نظام استنشاق الغاز فيت كيب #901812 COMPAC5 محاقن هاميلتون ميكرولتر هاملتون 10 و 25 و 50 و 100 ميكرولتر ؛ < / > 30 جرام لحقن الصهريج ماجنا بيروكسيد الهيدروجين أي بائع نظام التصوير IVIS 200 علوم الحياة الفرجار عدسة مكبرة مع ضوء أي بائع ميكرودريل Stoelting (أو أي بائع) #51555M تصوير التصوير بالرنين المغناطيسي بروكر سلسلة BioSpec اختياري نموذج أولي للفئران Ommaya (متوافق مع التصوير بالرنين المغناطيسي) مختبرات إنستيك ، إنك. #VAB620-25MRI-3.3 حاقن PinPort مختبرات إنستيك ، إنك. #PNP3M-50 بينبورت مختبرات إنستيك ، إنك. # 1-PNP3F28-50 الأدوات الجراحية للقوارض (مقص ، ملقط) أداة Roboz الجراحية (أو أي بائع) جهاز تجسيمي Stoelting (أو أي بائع) #51730M ورق أزرق معقم / غطاء ستارة أي بائع أعواد قطنية معقمة أي بائع