نموذج الخلايا الجذعية للورم الدبقي الموسوم بعلامة لوسيفيراز: طريقة بوساطة فيروس العدسي لإعداد الخلايا الجذعية للورم الدبقي الموسومة بعلامة لوسيفيراز للدراسات العلاجية في المختبر

الملخص

المصدر: Hu و Z. وآخرون. سير عمل سريع لتحديد العلاج المركب المحتمل ل GBM باستخدام الخلايا الجذعية للورم الدبقي المشتق من المريض. J. Vis. Exp. (2021)

يوضح هذا الفيديو إنشاء الخلايا الجذعية للورم الدبقي الموسومة باللوسيفيراز عبر توصيل الجينات بوساطة فيروس العدس. يعمل لوسيفيراز كجين مراسل ويساعد في تسهيل تجارب فحص الأدوية السريعة.

البروتوكول

1. إعداد GSCs الموسومة بعلامة Luciferase

1. ابدأ بثقافة GSCs وأجهزة الطرد المركزي عند 70 × جم لمدة 3 دقائق في درجة حرارة الغرفة.
2. قم بإزالة المادة الطافية وهضم الخلايا باستخدام أكوتاز لمدة 4 دقائق عند 37 درجة مئوية. استخدم طرف 200 ميكرولتر وماصة بشكل متكرر لفصل حبيبات الخلية وإعادة تعليقها.
3. خفف الخلايا إلى 2 × 10⁵ خلايا لكل بئر في صفيحة مزرعة مكونة من 12 بئرا وزرع الخلايا طوال الليل.
4. أضف 30 ميكرولتر من مادة طافية لفيروس لوسيفيراز EGFP (العيار >10⁸ TU / مل) في كل بئر في اللوحة ثم قم بالطرد المركزي للخلايا عند 1,000 × جم لمدة ساعتين عند 25 درجة مئوية.
5. قم بتحديث الوسط في اليوم التالي وزرع الخلايا لمدة 48 ساعة أخرى.
6. راقب الخلايا تحت المجهر الفلوري لتأكيد ظهور الخلايا الإيجابية ل GFP.
7. استخدم فارز خلايا التدفق لفرز وتحديد GSCs ذات التألق العالي GFP لزراعة الخلايا بشكل أكبر.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة الاسم الشركة رقم فهرسي التعليقات ب -27 جيبكو 17504-044 50 ضعفا EGF جيبكو PHG0313 20 نانوغرام / مل FGF جيبكو PHG0263 20 نانوغرام / مل جلوتا ماكس جيبكو 35050061 100 مرة العصبي العصبي جيبكو 21103049 1 مرة البنسلين - ستربتومايسين HyClone SV30010 P: 10،000 وحدة / مل S: 10،000 ميكروغرام / مل بيروفات الصوديوم جيبكو 2088876 100 ملم