الفحص القائم على التلألؤ البيولوجي الخلوي: طريقة إنتاجية عالية لفحص الأدوية التوافقية

Abstract

المصدر: Hu و Z. وآخرون. سير عمل سريع لتحديد العلاج المركب المحتمل ل GBM باستخدام الخلايا الجذعية للورم الدبقي المشتق من المريض.J. Vis. Exp.(2021)

في هذا الفيديو ، نصف طريقة تسلط الضوء على فائدة مقايسة التلألؤ البيولوجي للفحص الحساس والسريع للأدوية. يمكن اختبار هذه الأدوية بمفردها أو مجتمعة لتقييم التآزر في طريقة عملها.

Protocol

فئة

1. القياس القائم على التلألؤ الحيوي لبقاء الخلية

1. ألواح الطلاء بخليط المصفوفة خارج الخلية (ECM) (على سبيل المثال ، Matrigel): أضف 40 ميكرولتر من خليط ECM 0.15 مجم / مل إلى كل بئر واحتضن اللوحة لمدة ساعة واحدة عند 37 درجة مئوية. قم بإزالة خليط ECM الزائد واشطفه برفق مرة واحدة باستخدام PBS.
2. أضف 100 ميكرولتر وسط استزراع يحتوي على 15,000 و 10,000 و 8,000 و 6,000 و 4,000 و 2,000 و 1,000 و 500 خلية XG387-Luc جنبا إلى جنب مع 100 ميكرولتر من الوسط الفارغ كتحكم في كل بئر لمدة 6 مكررات في صفيحة سفلية بصرية 96 بئرا وزرع الخلايا بين عشية وضحاها عند 37 درجة مئوية.
3. قم بإزالة المادة الطافية ، وأضف 50 ميكرولتر وسط استزراع يحتوي على 150 نانوغرام / ميكرولتر D-luciferin في كل بئر واحتضان الخلايا لمدة 5 دقائق عند 37 درجة مئوية.
4. التقط صورا للتلألؤ الحيوي الخلوي في اللوحة باستخدام نظام التصوير الطيفي IVIS. استخدم البرنامج المدمج لإنشاء مناطق دائرية متعددة لمنطقة الاهتمام (ROI) وتحديد التلألؤ الحيوي الخلوي.

< p class = "jove_title" >2. علاج Temozolomide والفحص المركب

1. قم بتغطية أربعة أطباق مكونة من 96 بئرا كما هو موضح أعلاه في الخطوة 1 ، قبل العلاج.
2. بذور خلايا XG387-Luc بكثافة 1,000 خلية في وسط زراعة 100 ميكرولتر في كل بئر من صفيحة سفلية بصرية مكونة من 96 بئرا وزراعة الخلايا بين عشية وضحاها.
3. قم بإعداد temozolomide والعوامل المستهدفة من محلول المخزون مسبقا. تحضير سلسلة تركيزات مكونة من 800 ميكرومتر ، 600 ميكرومتر ، 400 ميكرومتر ، 300 ميكرومتر ، 200 ميكرومتر ، 100 ميكرومتر ، 50 ميكرومتر تيموزولوميد في وسط الاستزراع للمعالجة أحادية العامل. تمييع تيموزولوميد والعوامل المستهدفة في محلول المخزون في وسط الاستزراع ، على التوالي ، للحصول على تركيزات نهائية من 200 ميكرومتر و 2 ميكرومتر لفحص الأدوية المركبة (قائمة المواد).
4. قم بإزالة وسط الاستزراع عندما تلتصق معظم GSCs بأسفل الألواح ؛ أضف الوسط المعد أعلاه الذي يحتوي على temozolomide في كل بئر لثلاث مكررات تقنية لكل معالجة.
5. لعلاج Temozolomide وفحص تركيبات الأدوية ، قم بإزالة الوسط الفارغ وإضافة الوسط المحضر أعلاه الذي يحتوي إما على 200 ميكرومتر تيموزولوميد ، أو 2 ميكرومتر عامل مستهدف ، أو مزيج من الاثنين في كل بئر لثلاثة مكررات تقنية لكل معالجة.
6. احتضان جميع الألواح عند 37 درجة مئوية ، 5٪ ثاني أكسيد الكربون₂ لمدة 3 أيام.
7. قم بإزالة الوسط المحتوي على الدواء ، وأضف 50 ميكرولتر وسط فارغ يحتوي على 150 نانوغرام / ميكرولتر D-luciferin في كل بئر واحتضان الخلايا لمدة 5 دقائق عند 37 درجة مئوية.
8. التقط صورا للتلألؤ الحيوي الخلوي في اللوحة باستخدام نظام التصوير الطيفي IVIS. استخدم البرنامج المدمج لإنشاء عائد استثمار دائري متعدد وتحديد التلألؤ الحيوي الخلوي.

Materials