زرع نافذة تصوير الجمجمة في نموذج الفأر: إجراء جراحي لزرع غطاء زجاجي للوصول البصري المستقر إلى مناطق دماغ الفئران

الملخص

المصدر: Alieva، M. et al. تصوير طولي داخل حيوي لسلوك خلايا ورم الدماغ استجابة لخزعة جراحية جراحية.J. Vis. Exp.(2019)

يقدم هذا الفيديو إجراء جراحيا لزرع نافذة الجمجمة في نموذج فأر للوصول البصري المستقر إلى مناطق مختلفة من الدماغ.

البروتوكول

تمت مراجعة جميع الإجراءات التي تنطوي على نماذج حيوانية من قبل لجنة رعاية المؤسسية المحلية ومجلس المراجعة البيطرية JoVE.

فئة

1. زرع الخلايا السرطانية وإعداد نافذة التصوير بالجمجمة

1. التحضير الجراحي
   1. استخدم الفئران البالغة (>6 أسابيع) من أي سلالة أو جنس. تخدير الفأر عن طريق حقن الفلانيزون [ذهان الأعصاب] + الفنتانيل [المواد الأفيونية]) (0.4 مل / كغ) + مهدئ البنزوديازيبين (2 مجم / كغ) بجرعة 1: 1: 2 في ماء معقم. قم بتقييم حالة تخدير عن طريق قرصة إصبع القدم.
      ملاحظه: في هذا البروتوكول ، تم استخدام كل من الفئران C57BL / 6 من الإناث والذكور بسبب نفس الخلفية الجينية لخط الخلايا السرطانية المستخدمة في هذه التجارب (GL261). سيبقى الماوس مخدرا بالكامل لمدة 1.5 ساعة. بدلا من ذلك ، استخدم التخدير الاستنشاقي مثل الأيزوفلوران (خليط 1.5٪ -2٪ من الأيزوفلوران / O₂).
   2. قم بتركيب الماوس على إطار تجسيمي وقم بتأمين الرأس باستخدام مشبك الأنف وقضيبي أذن.
   3. استخدم مصباح تسخين للحفاظ على درجة حرارة الجسم. يجب استخدام مصباح التدفئة بحذر ، وبدلا من ذلك يمكن استخدام وسادات التسخين المعاد تدوير المياه.
   4. ضع مرهم العين لحماية قرنيات الفأر من الجفاف.
   5. استخدم مقصا حادا لحلق الفراء على الجمجمة (المنطقة الظهرية من عيون الفأر إلى قاعدة جمجمته) وتطهير الجلد المكشوف بنسبة 70٪ من الإيثانول.
   6. اقطع الجلد بطريقة دائرية بمقص حاد واكشط السمحاق تحته بقطعة قطن. ضع قطرة من الليدوكائين 1٪ + الأدرينالين 1: 100،000 لمدة 5 دقائق وقم بإزالة الفائض بقطعة قطن.
   7. الغراء حواف الجلد على الجمجمة مع الغراء cyanoacrylate.
   8. ضع الإطار التجسيمي تحت مجهر استريو تشريح مع تكبير 4x.
   9. تصور الجمجمة من خلال مجهر التشريح وحفر أخدود دائري قطره 5 مم فوق العظم الجداري الأيمن. قم بتنفيذ هذه الخطوة بعناية وبشكل سطحي فقط ، وتجنب أي ضغط على الجمجمة.
   10. ضع قطرة من القشرة العازلة (125 ملي كلوريد الصوديوم ، 5 ملي كلوريد كلوريد ، 10 ملي جلوكوز ، 10 ملي مولار عازلة HEPES ، 2 ملي ملي MgSO₄ ، و 2 ملي كلور_{الكالسيوم 2} [درجة الحموضة 7.4]) وارفع السديلة العظمية باستخدام ملقط رفيع.
   11. بالنسبة للخطوات التالية ، حافظ على سطح الدماغ مغطى بمخزن القشرة ما لم يذكر خلاف ذلك.
   12. تحت مجهر التشريح ، تصور سطح الدماغ وقم بإزالة الأم الجافية باستخدام ملاقط منحنية ومدببة ودقيقة جدا. إذا حدث نزيف في هذه المرحلة ، استخدم إسفنجة جيلاتين قابلة للامتصاص لإيقافه.

< p class = "jove_title" >2. إعداد نافذة تصوير الجمجمة

1. قم بإزالة عازلة القشرة وضع قطرة من زيت السيليكون على موقع حج القحف لتجنب فقاعات الهواء تحت النافذة.
2. أغلق الدماغ المكشوف بغطاء 6 مم. ضع غراء سيانواكريليت بين الغطاء والجمجمة. اضغط برفق على الغطاء على الجمجمة بمساعدة ملاقط دقيقة لضمان الحد الأدنى من المسافة بين الدماغ والغطاء.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة الاسم الشركة رقم فهرسي التعليقات 25 جم × 16 مم إبر تحت الجلد BD ميكرولانس إسفنجة جيلاتين قابلة للامتصاص شركه فايزر 300600 أغطية مستديرة 6 مم VWR الدولية جل فوم الغراء سيانواكريليت باتكس 631-0168 باتكس ألترا جل الاسمنت للأسنان فيرتكس لطب الأسنان Vertex العلاج الذاتي نقب دريميل Dremel 3000 (قد يكون مثقاب الأسنان أكثر ملاءمة) + 105 قاطع نقش ملاقط منحنية دقيقة دومونت زيت السيليكون سيجما ألدريتش AGT508 إطار تجسيمي ستويلتينج 181838 مجهر ستيريو جراحي أوليمبوس مختبر قياسي التجسيم, الفئران والفأر مرهم البصريات كيلا بيترينريا Duodrops المخضرم كيلا 10 م زيلوكائين (ليدوكائين 1٪ + أدرينالين 1: 100،000) مخدر موضعي أسترازينيكا زيلوكائين (ليدوكائين 1٪ + أدرينالين 1: 100،000) هيبنورم فيتا فارما المحدودة Hypnorm (سترات الفنتانيل 0.315 مجم / مل + فلوانيسون 10 مجم / مل) ميدازولام أكتافيس ميدازولام أكتافيس 5 مجم / مل