تمت مراجعة جميع الإجراءات التي تنطوي على نماذج حيوانية من قبل لجنة رعاية المؤسسية المحلية ومجلس المراجعة البيطرية JoVE.
فئة
1. الاستئصال الموجه بالفلورة وزرع السقالة
ملاحظة: تعقيم جميع الأدوات قبل تهيئة الجراحة.
- ضع الإطار التجسيمي على مسرح المجهر المجسم التشريح الفلوري.
- تخدير الفأر تحت الأيزوفلوران المستنشق في غرفة الحث. بمجرد التخدير ، قم بتأمين الماوس في الإطار التجسيمي مع إمداد التخدير المستنشق المستمر عبر محول مخروط الأنف الأيزوفلوران. حافظ على درجة حرارة الجسم باستخدام وسادة تدفئة و / أو مسبار.
ملاحظة: 4-5٪ إيزوفلوران مناسب للحث و 2-3٪ مناسب للصيانة ، ولكن يجب تكييف ذلك ومراقبته لكل فأر.
- ضع مرهم العين على العينين لمنع جفاف القرنية. عقم موقع شق فروة الرأس بسلسلة من ثلاثة كحول وثلاث مناديل بيتادين.
- قم بإجراء اختبار رد فعل قرصة إصبع القدم على كل طرف وتأكد من الاستجابة السلبية لضمان التخدير المناسب. ضمان معدل تنفس ثابت عند حوالي 55-65 نفسا / دقيقة.
- باستخدام الملقط ، اقرص فروة الرأس وارفعها برفق. قم بعمل شق ذيلية خطي في خط الوسط باستخدام مقص جراحي. قم بري موقع الشق باستخدام PBS وقم بإزالة الدهون تحت الجلد باستخدام قضيب طرف قطني بحركة تنظيف دائرية. رتب الجلد بحيث تكون نافذة الجمجمة التي تم إنشاؤها مسبقا مرئية بالكامل.
ثقب - الجافية برفق داخل حدود نافذة الجمجمة باستخدام إبرة 18G. كرر حتى يتتبع الشق الجزء الداخلي من النافذة بالكامل.
- قم بإزالة الجافية عن طريق تقشيرها باستخدام ملقط دقيق ، للكشف عن الحمة والورم الكامن.
- حدد موقع الورم U87 mCh-Fl عن طريق إطفاء أضواء الغرفة وتشغيل وضع التألق المجهري المجسم. استعد للاستئصال عن طريق تحميل طرف ماصة سعة 1-200 ميكرولتر في نهاية أنبوب مضخة التفريغ.
- قم بتشغيل مضخة التفريغ. استئصال الورم عن طريق شفط الأنسجة الفلورية برفق حتى لا تبقى أي إشارة. قم بإيقاف تشغيل مضخة التفريغ وتخلص من طرف الماصة. قم بإيقاف تشغيل التألق وأعد تشغيل أضواء الغرفة.
ملاحظة: للسيطرة على النزيف ، قم بالري باستخدام PBS البارد وقم بالضغط الثابت باستخدام قضيب طرف قطني. في الحالات الأكثر شدة ، يمكن أيضا تعبئة تجويف الاستئصال مؤقتا بعامل مرقئ طالما تمت إزالته بعد توقف النزيف متبوعا بري PBS آخر.
- قبل الزرع مباشرة ، قم بغمس سقالة PLA المصنفة ببطء في PBS لإزالة الوسائط غير المرغوب فيها والمكونات المرتبطة بها. زرع السقالة في تجويف الاستئصال. إذا لزم الأمر ، أضف 1 ميكرولتر من الفيبرينوجين (67-106 مجم / مل) متبوعا ب 1 ميكرولتر من الثرومبين (400-625 وحدة / مل) لتثبيت السقالة في مكانها.
- مع إزالة الجافية والتخلص من السديلة العظمية من نافذة الجمجمة بالفعل ، قم بإغلاق الجرح ببساطة عن طريق إغلاق الجلد ووضع الغراء الجراحي. قم بإزالة من التخدير المستنشق واتركه يتعافى على سطح ساخن.
